IgE是什么?与过敏有什么关系?说IgE之前,我们先来了解一下抗体,它的本质是蛋白质,确切地说,它是一种具有免疫功能的球蛋白,存在于血清、体液、外分泌液和一些细胞膜上,因此也叫做免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)。人体至少有5种免疫球蛋白,各自具有不同的免疫学功能,包括IgM,IgG,IgA,IgD和IgE。其中与过敏关系密切的是IgE抗体。IgE是Ⅰ型超敏反应机制中重要的免疫分子,自1967年IgE纯化以来,血清学检测已成为诊断超敏反应疾病常用的检测方法。单克隆抗体可以用于检测和监测特定分子的表达。浙江多克隆抗体公司排行
选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞,一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中,未融合的小鼠骨髓瘤细胞中DNA的从头合成途径会被阻止;未融合的骨髓瘤细胞又因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶(HGPRT),不能利用补救途径合成DNA;这样未融合小鼠骨髓瘤细胞的两个DNA合成途径都被阻止,骨髓瘤细胞DNA不能复制而死亡。 未融合的B淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。 只有融合的杂交瘤细胞由于从B淋巴细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,可以通过补救途径合成DNA,并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性,因此,杂交瘤细胞能在HAT培养基中存活和增殖。浙江多克隆抗体公司排行抗体的生产通常需要利用动物模型或体外细胞培养技术。
抗体特性和功能:正常人血清lgD浓度很低,仪占血清Ig总量的0.2%。IgD可在个体发育的任何时间产生。5类lg中,IgD的铰链区很长,易被蛋白酶水解,故其半衰期很短(只3天)。lgD分为两型:血清型IgD的生物学功能尚不清楚;膜结合型IgD(mlgD)构成BCR,是B细胞分化发育成熟的标志,未成熟B细胞只表达mlgM,成熟B细胞可同时表达mlgM和mIgD,称为初始B细胞(naive B cell)。活化的B细胞或记忆性B细胞表面的mlgD会逐渐消失。IgE是正常人血清中含量很少的Ig,血清浓度极低,约为5×10-5mg/ml。IgE主要由黏膜下淋巴组织中的浆细胞分泌。其重要特征为糖含量较高。IgE为亲细胞抗体,其CH2和CH3结构域可与肥大细胞和嗜碱性粒细胞上的IgE高亲和力Fc受体结合,引起I型超敏反应。此外,IgE与机体的抗寄生虫免疫相关。
单克隆抗体:解决多克隆抗体特异性不高的理想方法是制备识别单一表位特异性的抗体。如果能获得只针对单一表位的浆细胞克隆,并使其在体外扩增分泌抗体,就有可能获得单一表位特异性的抗体。然而,浆细胞在体外的寿命较短,难以培养。为克服这一缺点,Kohler和Milstein将可产生特异性抗体但短寿的B细胞与不产生抗体但长寿的骨髓瘤细胞融合,获得了可以产生单克隆抗体的杂交瘤细胞,从而建立了单克隆抗体制备技术。通过该技术融合形成的杂交瘤(hybridoma),既具有骨髓瘤细胞大量扩增和永生的特性,又具有免疫B细胞合成和分泌特异性抗体的能力。抗体在婴儿期主要来自于母体传递,随着年龄的增长,婴儿自身的抗体产生能力逐渐增强。
抗体可变区:重链和轻链的V区分别称为VH和VL。VH和VL中各含有3个氨基酸组成和排列顺序高度可变的区域,称为高变区(hypervariable region,HVR)或互补决定区(complementarity determining region,CDR), 包括HVR1(CDR1)、HVR2(CDR2)和HVR3(CDR3),其中,HVR3(CDR3)变化程度更高。VH的3个高变区分别位于29~31、49~58和95~102位氨基酸,而VL的3个高变区分别位于28~35、49~56和91~98位氨基酸。VH和VL的3个CDR共同组成Ig的抗原结合部位(antigen-binding site),决定抗体的特异性,是抗体识别及结合抗原的部位。在V区中,CDR之外区域的氨基酸组成和排列顺序相对保守,称为骨架区(framework region,FR)。VH或VL各有四个骨架区,分别用FR1、FR2、FR3和FR4表示。多克隆抗体是由多个不同的B细胞产生的抗体,具有普遍的特异性。浙江正常抗体生产厂家
抗体也可以通过血液透析、免疫球蛋白输注等方式进行passively transfer。浙江多克隆抗体公司排行
多克隆单克隆:天然的抗原分子中常含有多种不同的抗原表位,以该抗原刺激机体的免疫系统可同时启动多种B细胞克隆,产生的抗体中会含有多种针对不同抗原表位的抗体,因此称之为多克隆抗体。多克隆抗体主要从动物免疫血清、恢复期患者血清或免疫接种人群的血清中获得。多克隆抗体的优势是:作用全方面,具有中和抗原、免疫调理、补体依赖的细胞毒作用(CDC)、ADCC等重要作用,而且来源普遍、制备简单。其缺点是:特异性不高、易发生交叉反应,不易大量制备,因而限制了其应用的范围。浙江多克隆抗体公司排行