PI是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,它在嵌入双链DNA后释放红色荧光。常用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测,常用于流式细胞仪分析。尽管PI不能通过活细胞膜,但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI经常被用来与Calcein,AM、Hoechst33258或Hoechst33342等一起使用,能同时对活细胞和死细胞染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和615nm。2.染色过程(1)将1/10培养基体积的PI染色液加入到细胞培养基中(也可以用1/10浓度的PI缓冲液代替培养基)。(2)在37℃培养细胞10~20分钟。(3)用PBS或合适的缓冲液洗涤细胞两次。(4)用535nm激发波长,615nm发射波长的滤光器的荧光显微镜观察细胞。储存条件:-20℃干燥避光保存,有效期一年。注意事项:PI对人体有刺激性,请注意适当防护。Super Fluor 555(效果同Alexa Fluor 555)琥珀酰亚胺酯荧光染料。免疫荧光荧光染料APC
一:染色液制备1、配制储液:储液用无水DMSO或无水EtOH配制,浓度1~5mM。注:未使用的储液建议分装后储存在-20℃,避免反复冻融。2、工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基,HBSS或PBS)稀释储液,配制浓度为1~5μM的工作液。注:工作液**终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的10倍范围内开始比较好浓度的摸索。二:悬浮细胞染色1、加入适当体积的染色工作液重悬细胞,使其密度为1×106/mL。2、37℃孵育细胞2~20min,不同的细胞比较好培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记效果。3、孵育结束,1000~1500rpm离心5min。倾倒上清液,再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。4、重复步骤3两次以上。青海显微镜荧光染料Cy3染料的激发峰和发射峰分别在550 nm和570 nm左右。
三、细胞实验D-荧光素钾盐体外生物发光试验:D-荧光素钾盐,无菌纯水,完全培养基(自行配制)1、贴壁细胞:将细胞接种于培养板中孵育数小时或过夜,使细胞贴壁。悬浮细胞:可以将细胞接种于培养板后直接进行后续操作,无需孵育。如果倍增时间相对较短,则应考虑倍增时间进行细胞计数。2、将15mg荧光素钾盐溶解于1ml无菌水中,制备成100X荧光素储备液(15mg/ml),轻轻颠倒摇动至荧光素钾盐完全溶解。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。3、用预热好的细胞培养基1∶100稀释100X荧光素储备液(15mg/ml),配制成荧光素工作液(终浓度150μg/ml),即配即用。4、去除培养板中的培养基。5、在成像前,将适量荧光素工作液加入细胞中,然后进行图像分析。注意:成像前在37℃下对细胞进行短时间孵育可增强信号。孵育时间取决于特定的细胞类型。一般来说孵育10分钟就足够了,根据需要进行测试和调整。6、每隔10分钟,**多40分钟,使用VILBERFUSIONFX成像系统检查体外生物发光,确定动力学曲线并找出细胞的峰值成像时间点
其他细胞结构常用染料生物染料在细胞结构和组分鉴定中有着广泛的应用,除细胞膜研究外,我们经常也会对一些其它细胞结构及成分进行探索,例如线粒体、溶酶体、蛋白质、细胞核等,而对于不同的细胞结构有不同的染料进行染色细胞染色神器DAPI+PhalloidinDAPI染色液(DAPIStainingSolution)常用于细胞核染色,可将细胞核染成蓝色。鬼笔环肽(Phalloidin)是细胞骨架的染色神器,罗丹明标记的Phalloidin(TRITC-Phalloidin)可将细胞染成橙红色,DAPI与Phalloidin染色液是研究细胞形态变化时经常用到的两种共染的试剂,染色效果可见A1-E1用TRITC-鬼笔环肽(橙红)染色的细胞骨架免疫荧光图;A2-E2用DAPI(蓝色)染色的细胞核免疫荧光图;A3-E3合并的L929细胞免疫荧光染色图。是S100A16过表达或下调前后PDAC细胞形态的变化。染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一类亲脂性荧光染料家族,用于标记细胞膜和疏水性组织。
DiD,DiO,DiI,DiR和DiS染料是一族亲脂性的荧光染料,可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当与细胞膜结合后其荧光强度**增强,这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色,这类染料在整个细胞膜上扩散,比较好浓度时可以使整个细胞膜染色。它们的荧光颜**分明显:DiI(橙色荧光),DiO(绿色荧光),DiD(红色荧光)和 DiR (深红色荧光)这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分别用标准的 FITC和TRITC的滤光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激发,有着比DiI更长的激发波长和发射波长,在细胞和组织染色中更有价值。 DiR的红外荧光可以穿透细胞和组织,在***成像中用来示踪。SUPER Green I核酸染料特点 。陕西荧光染料Fluor 750
小动物成像荧光染料是一种先进的技术可以在小动物体内实时观察和研究细胞、组织的功能和代谢过程。免疫荧光荧光染料APC
在荧光显微术中,不仅蛋白质结构感兴趣,而且对核酸也感兴趣。有时有必要通过检测细胞核来确定细胞的确切位置或数量。最常见的DNA染色剂之一是DAPI(4',6-二氨基-2-苯基吲哚),主要与DNA双螺旋富含A-T的区域结合。与未结合态相比,DAPI在DNA上的荧光强度增加。染料被UV(紫外线)光激发,比较大激发波长为358nm。发射光谱较宽,峰值在461nm。弱荧光也可以检测到RNA结合。在这种情况下,发射转移到500nm。有趣的是,DAPI能够渗透完整的细胞膜。因此,该染料既可用于固定细胞也可用于活细胞。免疫荧光荧光染料APC
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