实时荧光定量PCR(qPCR)技术在生物制品质量控制方面应用非常普遍,如宿主细胞残留DNA检测,鼠源、禽源等外源病毒检测,微生物快检(支原体、分枝杆菌、细菌、真 菌等),复制型病毒检测(RCL、RCR、rcAAV等)、质粒拷贝数检测及其它工艺杂质检测等。qPCR检测结果以扩增曲线图呈现,正常扩增曲线为S型,分为基线期、指数扩增期、线性扩增期和平台期;线形光滑、拐点清晰,基线平直或略微下降,无明显上扬。定量检测实验中,对标曲的要求主要从斜率(与扩增效率相关)和R²两方面进行考察,要求斜率满足-3.8~-3.1(对应扩增效率为83.3%~110%),R²满足高于0.99。南京正扬有复制型腺相关病毒检测试剂盒性能如何?上海RCR病毒检测特点
用qPCR进行rcAAV复制型腺相关病毒检测时,哪些因素会对检测结果准确性和方法灵敏度存在较大影响?参考品DNA量值溯源及质量保证:参考品DNA的量值准确与否,直接关系到样品检测结果的准确性,因此需制定完善的参考品量值溯源程序,确保结果准确可靠。参考品DNA的质量要求可从条带大小、完整性、纯度、浓度等方面做多面评估,细胞来源的参考品应考察支原体污染,质粒参考品应考察质粒宿主E.coli基因组DNA残留情况等,尽量排除干扰确保结果准确可靠。深圳复制型慢病毒检测操作流程复制型腺相关病毒检测。
rcAAV复制型腺相关病毒检测过程中,标准品稀释环节有哪些注意事项?①用来做稀释的耗材建议使用1.5mL离心管,容量太大的耗材会增加DNA的吸附作用,容量太小易导致混匀不充分。②为了做出更好的线性,进行倍数稀释的时候要吸取较大体积标准品溶液(避免用1μL标准品+9μL稀释液这样的小体积体系进行稀释)。③每进行一步稀释都要进行充分的混匀,在点样前也要进行混匀。④为了提高准确性,每个浓度建议做3个复孔。欢迎联系南京正扬!
基因治 疗产品是近年来国内外药物研发的热点,通常由各种病毒或非病毒载体携带治 疗基因组成。在病毒载体中,慢病毒载体(LVs)由于其有效的将基因整合进靶细胞基因组、稳定的基因表达等特点,被认为是蕞有希望的基因治 疗载体。考虑到慢病毒对人的病原性及相关的安全性,所使用的慢病毒载体均为复制缺陷型载体,但在病毒载体生产过程中可能由于同源重组或非同源重组导致可复制性慢病毒(RCL)的产生,RCL可以整合到细胞基因组中,从而导致原ai基因激 活,抑ai基因破坏等,因此,这类产品中的复制型慢病毒检测是安全性检测中非常重要的项目,美国FDA及中国CDE都要求在生产的整个过程及不同阶段都要进行RCL检测,以确保无RCL的污染。南京正扬有复制型逆转录病毒检测试剂盒性能如何?
生物检测通常用于筛选载体产品中的RCR,而对输注后患者的监测则依赖于分子或血清学检测。分子和血清学检测比生物检测更快,消耗的资源更少;然而,它们也很容易给出误报。蕞常用的RCR病毒检测是扩展的S+/L-测定和标记拯救测定。蕞常见的RCL生物测定方法是通过在增殖阶段将包装细胞中的潜在RCL扩增至更高滴度,然后进行ELISA或分子测定。迄今为止,在病毒载体、转导的细胞产物或受体患者中尚未报告阳性RCR/RCL结果。因此,一些研究人员建议,可能是时候修改FDA指南中对RCR/RCL监测的要求。为什么要做重组腺相关病毒检测?广州rcAAV病毒检测常见问题
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目前针对RCL复制型慢病毒检测的方法差异很大,例如,实时定量PCR方法(Q-PCR法)会因为细胞或质粒DNA残留导致假阳性;合胞体形成测定法需要慢病毒具有完整的能力并且包含Env元件,该方法的灵敏度还未得到验证;标志物补救测定法尚不清楚来自载体生产过程中的RCL是否会济活标志物;逆转录酶活性测定法(PERT)不能区分RCL和载体颗粒,且细胞中固有的内源性 病毒颗粒也会影响检测结果的判断;细胞培养法检测时间过长。如您有需要,欢迎联系!上海RCR病毒检测特点