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胰酶中的酚红有哪些作用?酚红在培养基中被用来作为pH指示剂,中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。研究表明:酚红可以模拟固醇类***(特别是雌***)的作用。为避免固醇类反应,培养细胞尤其是哺乳类细胞时,建议用不含酚红的培养基。由于酚红干扰检测,在做流式细胞检测时,也会使用不含酚红的培养基或者胰酶。图 2. Phenol red test图片来源网络8、在做细胞凋亡检测时,细胞为什么不能用含有EDTA的胰酶消化?Annexin V(膜联蛋白)是Ca2+依赖的蛋白,EDTA会螯合Ca2+从而影响Annexin V,进而影响结果,因此需选用不含EDTA的胰酶。建议放入培养箱中进行消化,时间可以长一点。随时观察细胞情况,避免消化过度;也可使用细胞刮刀将细胞刮下,后用***吹匀,比消化简单,还可避免使用胰酶带来的伤害。胰蛋白酶溶液用于组织和单层细胞的解离。海南进口胰酶报价

    (不含EDTA含酚红)性质、用途与生产工艺背景胰酶又名胰醇素、胰液素。白色或淡黄色无定形粉末。系从各种动物胰脏制取的混合物,主要是蛋白酶、脂酶、淀粉酶。溶于水呈微浑溶液。不溶于醇、醚。有引湿性,遇酸、碱及热即丧失活力,水溶液遇酸、热、重金属或单宁酸时产生沉淀。为助消化药,用于缺乏胰液的***症。也用于皮革工业和纺织印染,主要用于酶法脱毛。将绞碎的猪胰浆经***、提取、沉淀、脱脂、干燥、粉碎而得。简介(不含EDTA含酚红)为细胞培养基,1.不含EDTA含酚红:含酚红,(1:250)溶于HBSS溶液,不含钙镁。-20℃保存。胰(不含EDTA含酚红)含,不含EDTA和酚红,溶于无钙镁平衡盐溶液中,经过滤除菌,可以直接用于培养细胞和组织的消化,通常室温消化2分钟左右就消化下大多数贴壁细胞。使用方法(不含EDTA含酚红)使用说明---贴壁细胞Chemicalbook的消化:a)吸去培养液,用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。b)加入少量胰蛋白酶消化液,盖过细胞即可,室温放置1-2分钟。不同的细胞消化时间有所不同,对于贴壁牢固的细胞可适当延长消化时间。c)显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化。 上海EDTA胰酶一般多少钱消化使用的胰酶是含EDTA还是不含的?

    使**或细胞片分散成单个细胞,制成细胞悬液用于进一步的实验。影响消化速度的因素较多,主要有胰酶溶液的活性(配制条件、冻存或4℃保存时间长短、是否反复冻融、化冻后存放时间及温度等)、消化时的温度(气温、细胞培养瓶及胰酶溶液的温度)以及所加胰酶溶液的多少等。加入胰蛋白酶-EDTA溶液,视细胞瓶的大小加入体积为2ml或更多(依培养器皿的大小而定),以使充分浸润;一般消化时间约为1至3分钟,肉眼观察瓶底由半透明(细胞单层连接成片)转为透明、点状(出现细小空隙)时,弃去细胞消化液,或看见培养瓶壁呈白茫状即可。并加入适量的完全培养液终止消化,吹打分散;如见大量细胞片状脱落,已消化过头,则不能顷倒消化液而直接进行下一步操作。(消化过头,可造成大量细胞从瓶壁上脱下,甚至造成细胞破碎。由于血清含有非特异性胰蛋白酶抑制剂,所以加入完全培养基可以终止反应。胰酶配置方法:1、培养液配制,方便好用,对细胞影响小,并且培养液的ph值正好适合胰蛋白酶的溶解2、生理盐水配制,要先调ph值(①胰酶(1:250)克②EDTA-Na③NaCl④KCl⑤Glucose⑥PhenolRed⑦Water1000mL磁力搅拌2-3小时,调pH,过滤**。)3、pbs(:称取胰酶粉末。

淡黄色的胰酶溶液能放心使用吗?能,对于胰酶呈黄色的问题,不同品牌也都对此现象进行了测试实验。变色的胰酶同样能很好的用于细胞的解离,请放心使用。细胞消化时,胰酶不去除对细胞的影响?细胞消化时,如果消化液中只有胰酶,不含EDTA,不去除是没有问题的。如果消化液中含有胰酶和EDTA,比较好去除。EDTA是一种化学螯合剂,主要作用在于能螯合Ca、Mg离子,使细胞分离。但EDTA不能被血清中和,消化后要彻底清洗去除,否则细胞易脱壁。胰酶胰酶和EDTA联合使用可提高消化效率,所以常二者合用。胰酶的保存胰酶是一种复合消化酶制剂。

    胰蛋白酶试剂同酶速率法测定。胰蛋白酶操作方法同酶速率法测定。胰蛋白酶正常值(1)RIA法:阴性。(2)酶速率法(37℃):十二指肠液:150~600μg/ml胰蛋白酶化验结果临床意义(1)升高:急性胰腺、慢性胰腺(复发期)、胰腺*、肾功能不全等。(2)降低:胰腺外分泌功能不全(慢性胰腺后期)。胰蛋白酶附注急性胰腺时血清胰蛋白酶可上升至正常人的2~400倍,一般在10~15天**正常。胰蛋白酶相关疾病急性胰腺、慢性胰腺、胰腺*[4]胰蛋白酶生物*品说明胰蛋白酶*理作用胰蛋白酶为肽链内切酶,对精氨酸和赖氨酸肽链具有选择性水解作用,可使天然蛋白、变性蛋白、纤维蛋白和黏蛋白等水解为多肽或氨基酸。由于血清中含有非特异性抑肽酶,故胰蛋白酶不会消化正常**,而能分解黏痰、脓性痰等黏性分泌物,能促进***、化疗*物向病灶渗透。胰蛋白酶适应证1.用于脓胸、血胸、外科症、溃疡、创伤性损伤、娄管等所产生的局部水肿、血肿、脓肿。2.用于呼吸道疾患溶解黏痰和脓性痰。3.用于***毒蛇咬伤,曾试用于竹叶青、银环蛇、眼镜蛇、蝮蛇等毒蛇咬伤的各型病人800余例,均获***。胰蛋白酶禁忌证1.肝肾出血、出血倾向及结核性脓肿患者禁用。2.不可用于急性症及出血空腔中。消化液经过过滤除菌,可以直接用于培养细胞的消化,或者一些组织的消化。上海EDTA胰酶一般多少钱

胰蛋白酶是一种胰丝氨酸肽链内切酶,作用于多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧。海南进口胰酶报价

    冰冻保存,但不得反复冻融。供试品溶液的制备取本品适量,精密称定,加。测定法取底物溶液、(pH)1ml,混匀,作为空白。取供试品溶液(预热至25℃±℃),立即计时并摇匀,使比色池内的温度保持在25℃±℃,照紫外-可见分光光度法(2010年版*典二部附录ⅣA),在237nm的波长处,每隔30秒读取吸光度,共5分钟,每30秒钟吸光度的变化率应恒定,且恒定时间不得少于3分钟。以吸光度为纵坐标,时间为横坐标,作图,取在3分钟内成直线部分的吸光度,按下式计算。式中P为每2500胰蛋白酶单位中含糜蛋白酶的量,单位;A2为直线上开始的吸光度;A1为直线上终止的吸光度;T为A2至A1读数的时间,分;W为测定液中含供试品的量,mg;,吸光度每分钟改变,即相当于1个糜蛋白酶单位。每2500单位胰蛋白酶中不得多于50单位的糜蛋白酶。干燥失重取本品适量,以五氧化二磷为干燥剂,在60℃减压干燥4小时,减失重量不得过(2010年版*典二部附录ⅧL)。胰蛋白酶效价测定底物溶液的制备取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐,加水溶解使成100ml,作为底物原液;取10ml,用磷酸盐缓冲液(取,pH值为)稀释成100ml,照紫外-可见分光光度法(2010年版*典二部附录ⅣA),恒温于℃±℃,以水作空白。海南进口胰酶报价

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