又能使培养基的破坏降低至比较低的工艺条件。许多实验研究结果表明,培养基在高温**的过程中,其营养成分的破坏在很大程度上可以用一级反应来描述其反应速度:式中—表示营养成分破环的速率,C:表示营养成分的浓度K':为反应速度常数,1/s,应速度常数K'与温度的关系,可以使用阿累尼乌斯公式表示之:K'=A'exp-△E'/RT……(1)式中——:反应速度常数,1/S:反应的活化能(J/mol)R:气体常数,*J/mol*kT:反应的***温度,k同样,**过程中的反应速度常数也可以用下式表示出:K=A×exp[-E/RT]……(2)(1)、(2)式可以改写成下列形式:lg(k,2/k,1)=E,/R×(1/T1–T2)……(3)lg(k2/k1)=E/R×(1/T1–T2)……(4)(3)(4)的意义是指:反应的温度从T1升高到T2,其反应的速度常数分别从k,1增加到k,2;k1增加到k2;培养基的**过程实际上是营养成分破坏、菌体死亡的两个平行性反应,对于平行性反应,反应温度的提高,其两个平行性反应的速度常数都增加,但增加的幅度(大小)却不同,其比值可以表示为:lg(k2/k1)/lg(k,2/k,1)=E/E,……(5)实验证明:营养成分为破坏的反应的活化能E的值为E,=—*103J/mol;而菌体死亡的活化能E芽孢:E=418*103J/mol。RPMI1640培养基在免疫细胞培养中表现出色。广西培养基进口
在s3中,将s2中消毒的外植体接入诱导培养基中培养,诱导培养基的配方为ms+,诱导培养基的ph值为,在s4中,将s3中的无菌外植体转接到增殖培养基中,增殖培养基的配方为ms+~~,增殖培养基的ph值为,在s5中,将s4中的绣球组培苗放入生根培养基中,生根培养基的配方为1/2ms+~~,生根培养基ph值为。通过采用上述技术方案,通过液体**培养技术,以芽为原材料,获取方便,增殖倍率高达8~10倍,生根率达到95%以上,苗木规格整齐,性状保持稳定,同时节省成本,适合工厂化大规模生产质量绣球种苗。诱导培养基萌芽率能达到90%,可以成功建立无菌再生体系。使用本增殖培养基,绣球组培苗增殖倍率能够达到8~10倍,组培苗高度一致,生长健壮。使用本生根培养基,绣球组培苗生根率能够达到95%,根系发达,健壮,可以成功用于移栽大棚。本发明在一较佳示例中可以进一步配置为:在s3中,将s2中消毒的外植体接入诱导培养基中后的培养环境为在光照强度1500lux条件下,温度25℃,光照时间16h;黑暗条件下,温度23℃,光照时间8h,培养6~8周。通过采用上述技术方案,在该培养条件下能够有效避免诱导培养阶段植物材料出现应激反应,植物材料能够快速适应诱导培养基。云南培养基进货价DMEM高糖培养基能够促进肿瘤细胞的快速增殖。
愈伤**诱导率为100%。如图6所示。对比培养例6:将cs基本培养基替换为ms基本培养基,其余完全同培养实例6,ms基本培养基的成分及用量如表1所示。ms诱导培养基的诱导结果为:本氏***叶片愈伤**诱导时,培养15-18d的叶片略微增厚,在叶片四周产生较少的淡绿色愈伤**,愈伤**诱导率为90%,在愈伤**团块上产生的嫩绿色不定芽数量较少;本氏***根愈伤**诱导时,培养9-11d在切口处产生大量淡黄色致密的愈伤**,愈伤**诱导率为100%。如图6所示。培养实例6和对比培养例6的诱导结果比较:用上述方法进行本氏***叶片愈伤**诱导时,cs诱导培养基愈伤**诱导率为100%,而ms诱导培养基的诱导率*为90%,在所述相同培养条件下,与ms诱导培养基相比,cs诱导培养基可更快诱导出大量致密的叶片愈伤**、产生更多的不定芽;用上述方法进行本氏***根愈伤**诱导时,cs诱导培养基与ms诱导培养基诱导出的根愈伤**形态相近,两种培养基的根愈伤**诱导率均为100%。如图6所示。培养实例7:水稻成熟胚愈伤**诱导(1)水稻种子消毒及筛选:a、选种:以籼稻缙恢10号为例,将水稻种子晾晒干燥后于4℃下长期保存,挑选籽粒饱满、大小基本一致的水稻种子,用剪刀从种子中部剪开,去除谷壳。
培养实例2和对比培养例2的培养结果比较:兰兹贝格型拟南芥种子在1/2cs生长培养基和1/2ms生长培养基上的萌发率均为100%;在相同条件下培养28d时,与1/2ms生长培养基相比,1/2cs生长培养基中的幼苗长势更佳,在平均株高、莲座叶大小、根长、花朵数量等方面均优于1/2ms生长培养基;并且,采用上述培养方法,不论是1/2cs生长培养基还是1/2ms生长培养基,均能获得形态完整的花粉,且花粉活力高达%,其特点在于选择了兰兹贝格型拟南芥作为培养对象,且选择了高度适中的培养盒进行培养,克服了传统培养方法无法获得拟南芥整个生育期无菌苗的缺点,所获无菌花***可直接用于花*离体培养等研究内容。如图2所示。培养实例3:油菜无菌苗培养与培养实例1不同的地方在于:步骤(1)所用种子为中双11号油菜种子,其余完全同培养实例1。1/2cs生长培养基的培养结果为:中双11号油菜种子在1/2cs生长培养基上的萌发率为100%,培养9d的幼苗,表现为植株健壮、平均株高为,叶色浓绿,茎秆粗壮、平均茎中粗为,根系发达、平均根数为(>)、平均主根长为。如图3所示。对比培养例3:将1/2cs基本培养基替换为1/2ms基本培养基,其余完全同培养实例3,1/2ms基本培养基的成分及用量如表1所示。RPMI1640培养基提高了细胞的存活率和生长速率。
无动物组分无血清细胞培养基的应用三、细胞培养基的质量标准和检测方法澄清度水是细胞培养基的溶剂。细胞培养基中的营养成分只有完全溶解于水才能被细胞吸收摄取,细胞才能生长增殖,因此细胞培养基是否溶解以及培养液是否透明澄清直接影响培养基使用。该项目是通过对水溶解后的细胞培养基的澄清度检查,判断细胞培养基的澄清度。按中华******典2005年版二部附录ⅨB进行。pH值哺乳类动物细胞生长需要合适的酸碱度,pH过高或者过低都会导致细胞死亡。pH值的测定也可以检查细胞培养基的批间差。清大天一标准规定取规定量供试品,用注射用水(水温20℃-30℃)溶解至1L,加入规定量碳酸氢钠到上述溶液中,用与细胞培养基溶液pH值相近的两点标准缓冲液校准后的酸度计进行测定。按中华******典2005年版二部附录ⅥH进行;加入规定量的碳酸氢钠(见表4-12)到上述溶液中,按中华******典2005年版二部附录ⅥH进行。干燥减量的质量分数细胞培养基具有吸湿性,在空气中放置水分会很快升**燥减量的质量分数表示产品中含湿量。细胞培养基是有菌制剂,其丰富的营养成分有利于微生物生长,控制细胞培养基中的水分可以防止微生物的繁殖,保持细胞培养基的养分。MEM培养基在细胞培养中表现出高效的稳定性。云南培养基进货价
F12培养基适用于复杂细胞培养实验。广西培养基进口
二氧化碳不断被释放,培养液变酸,pH值发生变化。酚红是细胞培养基中**常用的pH指示剂,但依靠细胞培养基中的酚红等pH指示剂进行判断,需要实验员的经验积累,存在较大的主观性。实际上,个性化细胞培养基或是无血清细胞培养基中酚红含量较少或是不含酚红,只能通过pH计或者pH电极进行pH值的检测,结果更为准确可靠。缓冲能力细胞培养基应具有一定的缓冲能力。细胞培养过程中造成细胞培养液pH波动的主要物质是细胞代谢产生的CO2。在封闭式培养过程中CO2与水结合产生碳酸,细胞培养液pH很快下降;打开培养器具时CO2逸出则会引起pH升高。细胞培养基通常采用NaHCO3-CO2缓冲系统,按下列化学反应方程式调节细胞培养基的pH值:H2O+CO2→H2CO3⇌H++HCO3-NaHCO3⇌Na++HCO3-此外,还有缓冲能力较高的磷酸盐缓冲系统。但碳酸盐缓冲系统的细胞毒性小、成本低,在细胞培养中应用得更为***。另一种较为常用的缓冲液是HEPES(羟乙基哌嗪乙硫磺酸)液,它是一种非离子两性缓冲液,在pH~。高浓度的HEPES可能对细胞**性作用,细胞培养时HEPES的添加浓度一般为10~25mmol/L。渗透压细胞必须生活在等渗的环境中,大多数体外培养的细胞对渗透压有一定耐受性。研究显示。广西培养基进口