青海DMEM/F12培养基介绍

    将未发生霉变的带有胚的一半种子用于愈伤**诱导实验；b、**消毒：于无菌环境下，将挑选的种子置于无菌三角瓶中，用无菌水清洗3-5次，75％酒精摇动清洗5min，无菌水清洗3-5次，5％naclo浸泡30min(期间每隔5-10min摇动30s)，清水洗3-5次，种子表面的无菌水可用干燥的无菌滤纸吸去。(2)配制诱导培养基：cs基本培养基+，用超纯水溶解，。cs基本培养基的成分及用量如表1所示。(3)愈伤**的诱导方法：用弯头镊子将无菌种子的缺口一端倾斜插入cs水稻成熟胚愈伤**诱导培养基，胚贴于培养基表面；于温度24-26℃、湿度50-70％、光照强度1500-2500lux、光照和黑暗交替(光照时间16h、黑暗时间8h)条件下培养。(4)cs诱导培养基的诱导结果为：水稻成熟胚愈伤**诱导时，经cs诱导培养基诱导培养12-14d产生大量淡黄色结构致密的团状愈伤**，出愈率为100％。如图7所示。对比培养例7：将cs基本培养基替换为ms基本培养基，其余完全同培养实例7，ms基本培养基的成分及用量如表1所示。ms诱导培养基的诱导结果为：水稻成熟胚愈伤**诱导时，经ms诱导培养基诱导培养12-14d产生大量淡黄色结构致密的团状愈伤**，出愈率为100％。如图7所示。DMEM培养基适用于多种类型的哺乳动物细胞。青海DMEM/F12培养基介绍

    文献2“混合硝酸稀土对谷氨酸产生菌的影响，氨基酸杂志”发现，在发酵培养基中添加一定量的稀土元素，能够提高谷氨酸的产量。申请人之前的**技术“一种谷氨酸发酵培养基制备方法”，在常规培养基的基础上进行了改进，通过添加菌体蛋白浸膏来替代酵母膏氮源，不但节约了成本，还能提高氨基酸发酵产率，一举两得。技术实现要素：在已有发酵培养基的基础上，申请人针对微生物发酵的特点，继续进行了改进，以提高发酵效率，据此，提出了一种优化的谷氨酸发酵培养基。本发明是通过如下技术方案来实现的：一种优化的谷氨酸发酵培养基，其包括发酵培养基a和发酵培养基b；所述发酵培养基a首先添加，然后间隔12h以上添加发酵培养基b。进一步地，所述发酵培养基a的制备方法为：取各原料：葡萄糖，酵母浸膏，k2hpo4，mgso4·7h2o，2-羟基乙胺，cecl3，mnso4·h2o，feso4·7h2o，vb1，生物素；将各原料搅拌均匀后，调节ph，**，制得发酵培养基a。进一步地，所述发酵培养基b的制备方法为：取各原料：琥珀酸，尿素，壳聚糖；将各原料搅拌均匀后，调节ph，**，制得发酵培养基b。推荐地，所述发酵培养基a的制备方法为：取各原料：葡萄糖50-100g/l，酵母浸膏10-30g/l，k2hpo41-5g/l。中国香港MEM a培养基牌子无血清培养基适合于需要无血清环境的细胞系。

    二氧化碳不断被释放，培养液变酸，pH值发生变化。酚红是细胞培养基中**常用的pH指示剂，但依靠细胞培养基中的酚红等pH指示剂进行判断，需要实验员的经验积累，存在较大的主观性。实际上，个性化细胞培养基或是无血清细胞培养基中酚红含量较少或是不含酚红，只能通过pH计或者pH电极进行pH值的检测，结果更为准确可靠。缓冲能力细胞培养基应具有一定的缓冲能力。细胞培养过程中造成细胞培养液pH波动的主要物质是细胞代谢产生的CO2。在封闭式培养过程中CO2与水结合产生碳酸，细胞培养液pH很快下降；打开培养器具时CO2逸出则会引起pH升高。细胞培养基通常采用NaHCO3-CO2缓冲系统，按下列化学反应方程式调节细胞培养基的pH值：H2O+CO2→H2CO3⇌H++HCO3－NaHCO3⇌Na++HCO3－此外，还有缓冲能力较高的磷酸盐缓冲系统。但碳酸盐缓冲系统的细胞毒性小、成本低，在细胞培养中应用得更为***。另一种较为常用的缓冲液是HEPES（羟乙基哌嗪乙硫磺酸）液，它是一种非离子两性缓冲液，在pH~。高浓度的HEPES可能对细胞**性作用，细胞培养时HEPES的添加浓度一般为10～25mmol/L。渗透压细胞必须生活在等渗的环境中，大多数体外培养的细胞对渗透压有一定耐受性。研究显示。

    将蒸过的原料置于室温下过夜，未被杀死的孢子便发芽生长，芽孢发育成营养细胞，再30min便可杀死。如此连续反复进行2-3次，亦可达到彻底**的目的。3、分批**的操作分批灭歇是在所用的发酵罐或其他培养装置中进行的，它是在配制罐中配好培养基后，通过**管道输入发酵罐等培养设备中，然后开始**。在进行培养基的间歇**之前，通常先将发酵罐等培养装置的分空气过滤器进行**，并且用空气将分过滤器吹干。开始**时，应先放去夹套或蛇管中的冷水，开启排气管阀，通过空气管向发酵罐内的培养基通入蒸汽进行加热，同时，也可在夹套内通蒸汽进行间接加热。当培养基温度升到70℃左右时，从取样管和放料管向罐内通入蒸汽进一步加热，当温度升至120℃，罐压为1*105Pa（表压）时，打开接种、补料、消泡剂、酸、碱等管道阀门进行排汽，当然在保温过程中，应注意凡在培养基液面下的各种进口管道都应通入蒸汽，而在液面以上的其余各管道则应排放蒸汽，这样才能不留死角，从而保证**彻底。保温结束后，依次关闭各排汽、进汽阀门，待罐内压力低于空气压力后，向罐内通入无菌空气，在夹套或蛇管中通冷水降温，使培养基的温度降到所需的温度，进行下一步的发酵和培养。DMEM培养基在实验室中广泛应用于细胞实验。

    本氏***叶片及根愈伤**诱导的对比效果图，a：叶片愈伤**；b：叶片愈伤**诱导率；c：根愈伤**；d：根愈伤**诱导率；a和c中bar＝；图7是cs和ms两种培养基上，水稻成熟胚愈伤**诱导的对比效果图，a：水稻成熟胚愈伤**；b：水稻成熟胚愈伤**诱导率；a中bar＝；图8是用不同ph的超纯水(ph为)配制的cs、ms、1/2cs和1/2ms液体培养基ph值稳定性比较效果图；图9是在未调ph和将ph调至、ms、1/2cs和1/2ms液体培养基中马铃薯幼苗的生长状况的比较效果图，a：不同液体培养基培养前的无菌苗生长情况；b1、c1和d1：1/2ms未调ph液体培养基培养效果；b2、c2和d2：1/2cs未调ph液体培养基培养效果；b3、c3和d3：ms未调ph液体培养基培养效果；b4、c4和d4：cs未调ph液体培养基培养效果；b5、c5和d5：1/；b6、c6和d6：1/；b7、c7和d7：；b8、c8和d8：；a、b、c和d中bar＝；图10是对在未调ph和将ph调至、ms、1/2cs和1/2ms液体培养基中马铃薯幼苗的茎高(a)、茎中粗(b)、根长(c)、鲜重(d)进行统计的比较效果图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本发明作进一步描述。实施例一，本实施例广适性植物**培养基，其每1000ml培养基中含有：kno32662mg、。无酚红培养基在细胞实验中减少了不必要的干扰。新疆Ham's F12培养基代理商

无血清培养基确保了实验结果的高度准确性。青海DMEM/F12培养基介绍

    1)、初代培养：绣球外植体，将叶片剪去，自来水冲洗干净。在超净工作台上把已经冲洗干净的外植体浸入75％酒精中消毒30s，用无菌水冲洗3～4次。使用白猫漂白水和无菌水按1：4的体积比配制消毒液，将外植体放入消毒液浸泡40min，其中白猫漂白水为上海白猫(集团)有限公司生产的“白猫”牌家用漂白水。消毒完成，将外植体接种到诱导培养基中培养，建立无菌再生系统，诱导培养环境为光照强度1500lx条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养6～8周。其中诱导培养基为ms+～～，诱导培养基的ph值为。(2)、继代培养：以建立的无菌再生系统为对象，将无菌外植体转接到增殖培养基，其中增殖培养基为ms+～～，培养环境为光照强度1500lx条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养8～12周。每隔8～12周转接入新的增殖培养基，增殖培养基的ph值为。(3)、生根培养：经过继代培养的绣球组培苗，取2～3cm的顶芽，放入生根培养基，其中生根培养基为1/2ms+～～，生根培养基的ph值为。诱导培养环境为光照强度1500lx条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养8～12周。。青海DMEM/F12培养基介绍