改造抗体的重链氨基酸序列如seqid**所示;或改造抗体的重链氨基酸序列如;或改造抗体的重链氨基酸序列如,轻链氨基酸序列如。可以理解,本发明的改造抗体不限于以上几种,只要是经过蛋白质改造降低了与fc受体的亲和力的细胞培养用抗体均可。细胞培养本发明一个实施方式的细胞培养方法,包括以下步骤:在培养体系中添加改造抗体;所述改造抗体为将互补决定区以外的区域经过蛋白质改造的细胞培养用抗体,所述改造抗体与fc受体的亲和力低于未经过蛋白质改造的细胞培养用抗体与fc受体的亲和力。在一些实施方式中,细胞类型为淋巴细胞、粒细胞、肥大细胞、dc细胞、巨噬细胞、单核细胞和血小板中的一种或多种。所述的细胞来源于人血液、**、手术切除的人实体*、腹水。可以是新鲜采集的静脉血、脐带血,也可以是冷冻保存的pbmc细胞。可以理解,细胞类型不限于此,只要培养体系中有部分细胞的表面表达fc受体皆可。在一些实施方式中,设计细胞生物学试验以定量检测改造抗体针对特定起始材料细胞群中目标细胞的功能活力,这包括细胞扩增试验、细胞毒性试验、细胞杀伤试验、细胞迁移试验等。在一个具体的实施例中,用改造抗体来刺激人pbmc中t细胞(cd3+)的增殖,定量确定抗体的活力。1640培养基能够支持细胞的长期培养。黑龙江基础细胞培养基供应商家
包括以下步骤:在培养体系中添加改造抗体;所述改造抗体为将互补决定区以外的区域经过蛋白质改造的细胞培养用抗体,所述改造抗体与fc受体的亲和力低于未经过蛋白质改造的细胞培养用抗体与fc受体的亲和力。本发明还披露了一种改造抗体,所述改造抗体为将互补决定区以外的区域经过蛋白质改造的细胞培养用抗体,所述改造抗体与fc受体的亲和力低于未经过蛋白质改造的细胞培养用抗体与fc受体的亲和力。本发明还披露了一种细胞培养基,包含基础培养基和所述改造抗体。本发明还披露了一种细胞产品,所述细胞产品为根据上述细胞培养方法得到的细胞产品。本发明还披露了一种上述细胞产品在制备对肿*细胞具有杀伤作用的*物和试剂中的应用。本发明还披露了一种用于*症***的*物,包括上述细胞产品。本发明还披露了一种用于异体细胞***的*物,包括上述细胞产品。基于上述技术方案,本发明具有以下有益效果:该发明适用于已建立的细胞培养工艺,对细胞培养用抗体的原有机制没有变动,对培养工艺不需要做大的改动。特别适合目前***使用的大规模细胞培养工艺中将细胞培养用抗体直接加入培养基的情况,操作简便。本发明可以提高细胞培养用抗体在细胞培养体系中的稳定性。内蒙古基础细胞培养基供应商家DMEM培养基适用于基因编辑实验。
含稳定转染荧光素酶的raji细胞)。检测方法传代培养raji-luc细胞,收集细胞后用pbs调整密度至5e6/ml,经尾静脉注射100μl至每只nsg小鼠体内。48小时后将小鼠根据体重随机分为2组,分别经尾静脉注射生理盐水100μl(对照组)和nk细胞1e7(试验组)。在体内成像仪(perkinelmer,ivisluminaltinvivoimagingsystem)上测量肿*生长情况,收集成像信号图和信号强度。结果讨论在一个为期19天的试验中,对照组小鼠的平均成像信号强度增长到了,而试验组的到了,为对照组的%(图14)。结果显示,nk细胞具有明显的体内杀伤活力。应用实例3nk细胞产品对肿*细胞的动物体内adcc杀伤活力检测本测试用培养实例3中的试验组扩增获得的nk细胞产品和***用抗体在小鼠raji-luc血液*模型上进行体内adcc杀伤试验,来确定nk细胞的体内活力。材料nsg小鼠(6-8周龄),raji-luc细胞(含稳定转染荧光素酶的raji细胞),利妥昔单抗ritu***mab。检测方法按照应用实例2的方法建立小鼠raji-luc血液*模型后,分为4组,分别注射生理盐水(g1,空白组)、利妥昔单抗(g2)、nk细胞(g3)和联合用*(g4,即同时输入利妥昔单抗和nk细胞)。继续饲养,定期测量肿*生长情况,观察动物生长和生存状态。结果讨论从各组小鼠的存活结果。
然后是肝部,在一些推荐实施方式中,上述免*细胞产品用于肺*和肝*的***。nk细胞表面富表达fcγriii(cd16),是adcc作用的主要效应细胞。在一些实施方式中,nk细胞可与***用抗体联合用于adcc杀伤研究。在一些推荐实施方式中,nk细胞产品可与***用抗体利妥昔单抗ritu***mab联合用于淋巴*的***。在一些推荐实施方式中,nk细胞产品可与***用抗体曲妥珠单抗trastuzumab联合用于乳腺*和胃*的***。在一些推荐实施方式中,nk细胞产品可与***用抗体西妥昔单抗cetu***mab联合用于头颈部*和结直肠*的***。nk细胞还可以通过非自我或是自失效应(missing-self)来识别和杀伤目标。这种细胞杀伤是非mhc限制性的(non-mhc-restrictedcytoto***city),不会引起移植物抗宿主病(graft-versus-hostdisease,gvhd),因此,nk细胞可应用于异体移植***。在一些更加推荐的实施方式中,上述高纯度的nk细胞产品和car-nk细胞产品用于人同源异体细胞***,但可以理解,用于同源异体细胞***的细胞产品不限于此。以下通过具体实施例对本发明做进一步详细的描述,但本发明的实施方式不限于此。无酚红培养基减少了酚红对细胞的影响。
spectramaxm5microplatereaders)上读取490nm吸收光值。杀伤率计算公式如下:杀伤比例=(杀伤试验信号–效应细胞自发释放信号–靶细胞自发释放信号)/(靶细胞**大释放信号–靶细胞自发释放信号)×100%结果讨论对raji细胞的杀伤试验结果如图11所示。可以看到,nk细胞对raji细胞在e/t=1:1时已有基础直接杀伤,但两组的杀伤率相差不大。在加入ritu***mab后,nk细胞被***,试验组nk的杀伤率从%提升到%。对照组nk同样也被***,但*从%提升至%,与试验组的有明显差距。adcc杀伤是特异性的,在加入trastuzumab时,nk细胞不会被***,两组nk细胞在这种条件下的直接杀伤率相差不大。对bt-474和mcf7细胞的杀伤试验结果如图12和图13所示。可以看到,试验组nk细胞对bt-474细胞的杀伤率与对照组的相比,无论是直接杀伤还是adcc杀伤,都明显占优。同样,试验组nk细胞对mcf7细胞的杀伤率与对照组的相比,无论是直接杀伤还是adcc杀伤,都明显占优。应用实例2nk细胞产品对肿*细胞的动物体内直接杀伤活力检测本测试用培养实例3中的试验组扩增获得的nk细胞产品在小鼠raji-luc血液*模型上进行体内杀伤试验,来确定nk细胞的体内活力。材料nsg小鼠(6-8周龄),raji-luc细胞。DMEM培养基在基因编辑实验中常被使用。内蒙古MEM细胞培养基哪个好
1640培养基提供了多种关键营养成分。黑龙江基础细胞培养基供应商家
吸去孵育液,加入试剂盒提供的洗液400ul/孔,洗涤3次,吸干洗液后,加入200ul/孔sdf-1α结合物,500rpm水平摇床室温孵育2小时;⑤重复步骤③中的洗涤步骤,彻底吸干残留洗液;⑥加入200ul/孔底物显色液,室温、避光反应30分钟后,每孔加入50ul终止液,于450nm波长(使用570nm作为校正波长)读取结果。⑦根据所测od值,结合标准品的标准曲线(表1),确定样品中的sdf-1α的含量(表2)。⑧检测结果:见附图2。表1sdf-1alpha测定标准曲线的测定两个样品msc-cm1和msc-cm2测定的od值及根据标准曲线线性回归公式所计算的sdf-1α在相应样品中的含量见下表:表2sdf-1α在相应样品中的含量实施例3msc-cm对上皮细胞生长的影响的检测msc-cm中生物活性分子的功能通过检测msc-cm对人**成纤维细胞生长的影响来进行测定,人**成纤维细胞采用hdf(humandermalfiborblast,人**成纤维细胞,购自美国cellapplications(cat#:106k-05a),为16周岁人包皮细胞分离而来)。mtt试剂盒购自碧云天生物技术有限公司,产品目录号:c0009。①测试样品培养基的制备:首先配制500ml含10%胎牛血清的dmem/f12培养基,备用(此培养基也是hdf细胞生长培养基),取2种不同方式制备的msc-cm冻干品。黑龙江基础细胞培养基供应商家