计算机辅助精子分析W.H.O 4

CASA，即计算机辅助精子分析，是一种利用技术手段对精子活力、浓度和形态进行精确评估的方法。WHO第五版指南强调，相比人工检测，CASA提供更准确的数据和精子动力学参数，如前向运动和超活化运动，以及获能精子特征参数。研究显示，CASA检测的精子参数与体内外受精成功率和受孕时间有***关联。使用CASA分析仪，通常通过相差显微镜识别活动精子，适用于精子动力学分析。但要确保可靠结果，操作者需注意标本制备、帧频率、精子浓度等因素。每份样本至少需要分析200个活动精子的运动轨迹，更多精子样本有助于分类和变异性的分析。国内已有自主研发的精子分析仪，通常进行两次分析，每次至少200个精子，结果通过统计学分析得出。CASA在评估精子浓度时，需精确测量精子体积，确保**完全液化并充分混匀。计数板的精确性和计数一致性是关键，每次检测需满足5个视野和200条以上精子的比较低要求。对于高浓度**，可能需要稀释以减少误差。形态分析方面，CASA能够定量评估精子头部、中段和主段，尾部缺陷可通过活力评估。对于碎片过多或黏稠的**，可能需要洗涤以减少背景干扰。CASA中涉及一系列术语，如VCL（曲线速度）、VSL（直线速度）等，它们反映了精子运动的不同特性。HAMILTON THORNE精子分析仪可分析参数，直线性（LIN）‌：曲线轨迹的直线性。计算机辅助精子分析W.H.O 4

定量测定是医学发展的重要保证。WHO1980年出版了男科实验室手册***版及以后版本［1］‚对有关男科的实验进行了详细的阐述。对计算机辅助精子分析进行质量管理包括：计算机本身的软硬件、CASA分析结果、工作人员的具体操作几方面。CASA参数包括精子数量和各种活动力变量‚其质量包括所测得数据的可靠性、精确度、如何避免差错和数据的正确性及确认‚以及分析中的标准［2］。CASA质量管理关系到男科实验室中**分析的质量‚具有以下特点：⑴在实验室内部质量和医生处置质量方面‚优于其它测定精子运动的方法；⑵CASA结果及结果质量的评估较困难；⑶WHO标准是医生处置质量保证的基础；⑷今后应加强操作人员的培训。广州前向运动精子分析LINHamilton Thorne精子分析仪的操作简单易懂，用户无需具备专业知识也能够轻松上手使用。

通过结果的生物学意义对结果质量进行评估‚当所有具生物学意义的参数在测试中表现出较小的可变性时则方法学可变性亦较低方法学可变性低则结果质量就高。CASA系统获得的数值与直观评估获得的数值进行分析和比较在精子数量和综合运动性上具有较好的相关性而·131·中国优生与遗传杂志2002第10卷第6期DOI:10．13404／j．cnki．cjbhh．2002．06．091在前向运动精子百分率上的相关性较低］。Holt等报道了在常规实验条件下采用五种不同的CASA系统对**参数值进行比较，其结果为：采用同一个测定池由不同的操作者测定**参数；变异系数（CV）是29％‚活动精子比率的CV为24％‚平均路径速度（VAP）的CV为43∙85％。作者们指出该分析结果不应看作是不同CASA系统间的工作情况的比较‚实际上它揭示了操作者的错误是差异的主要来源。目前有待于寻找进一步的标准来评估CASA变量的结果质量。精子***的生物学功能是使卵细胞授精‚因此用夫妇中的授精结果来考察精子运动性是合理的‚只有在该基础上能够确定活动性参数的重要性。辅助生殖技术（授精IVF）的发展使检测精子质量与各参数间的关系的比较成为可能；同样可以验证CASA测定结果与精子真实质量间的相关性有利于CASA结果质量的提高。

人类精子冷冻保存和储存：增加了冷冻样本的安全性、精液冷冻保存方案、快速液氮熏蒸冷冻、冷冻精液的解冻、玻璃化冷冻等内容，更具可操作性。本手册对人类精子的冷冻保存提出了具体建议：将样本分管分罐分开储存；对使用的材料和留存标本建立定期核验程序；所有储罐都应有液位监控报警系统，以监测温度和液氮液位，传感器应连接警报器，可通过实验室人员的终端进行提醒。新证据表明，玻璃化冷冻是冷冻保存精液的一种有价值的方法。该方法的原理是将小体积样本与无污染液氮直接接触并快速冷冻，可以防止冰晶的形成，并减少精子的渗透性损伤。在麦管玻璃化冷冻(无菌玻璃化冷冻)中，也可以使用封闭系统，不需要无菌的液氮。Hamilton Thorne精子分析仪具有高度的可靠性和稳定性，能够长时间稳定运行，保证数据的准确性和可重复性。

1.基本检查：是确定精液变量稳定的常规方法，不仅是男科实验室，任何开展精液检查的实验室都能遵循。精子计数依然推荐使用改良Neubauer血细胞计数板的方法，但计数的方法有了改变。明确推荐了伊红笨胺黑染色法作为精子存活率诊断的优先方法，伊红染色和低渗肿胀实验只作为备选方法。删减了参考值下限的描述。对于精子活动率大于40%的样本没有必要做存活率评估。与第5版手册中淡粉色判读为活精子不同，明确了只有精子头为白色的精子为活精子、淡粉色为死精子。临床数据表明，鉴别快速前向运动精子非常重要。因此，关于精子活力分级，第6版手册建议恢复到快速前向运动、慢速前向运动、非前向运动和不活动4个活力级别，但精子活动率的参考值范围却依然是按前向运动(PR)、非前向运动(NP)、不活动(IM)3个活力级别计算。第6版手册强调，精子形态学评估的价值不仅在于其可用于判断自然妊娠和辅助生殖技术(ART)结局的预后，还可以为男性生殖***包括睾丸和附睾功能判断提供更多诊断信息。对于3%和5%的精子“正常”形态率的判断，则要求必须由训练有素的人员评估1500个精子来完成；对于无尾精子(只有头部的精子)超过总精子数20%的精液，应单独计算并在报告中注明；IVOS具有高分辨率和高灵敏度的特点，能够捕捉到微小的细节和变化，进一步提高了精子分析的准确性。人精子分析精子动力分析

全自动精子分析仪严格按照世界卫生组织（WHO）和KRUGER标准，并通过ISO9001认证。计算机辅助精子分析W.H.O 4

通过比较进行质量评估1．室内比较是采用同一个标本在同一参数下‚经CASA多次测定后‚应用适当的统计学方法对测得数值进行比较。在男科实验室中对CASA系统的质量控制通常使用影像磁带或完全相同的冻存**标本进行日间比较。当室内比较作为结果质量的一种评估时‚计算机中数值的在线获得是极具优势的。2．室间比较要求标本向其他几个实验室运送文献中的一些报道阐述了该方面的经验但是运动精子是不能在不受限制的条件下运输的将其置于液氮中运送需进一步考虑更多的因素（解冻技术、标本的处理等）这些因素会影响活动力参数；到目前为止室间比较的研究还未见满意报道；Jorgensen等进行了研究尝试克服实验室间运送解冻标本的困难其研究方式是：邀请四个实验室的实验人员携带各自的仪器到同一个地点以各自通常采用的实验方法进行精子评估但未见明确的结论。3．对于精子活力测定CASA系统的测定与直观评估的比较有文献进行了报道但结果并不相同。认为直观评估揭示标准数值且其差异是由CASA系统的错误引起的该观点是不正确的；无论从理论上还是实践中CASA数值比直观评估所获得的数值更接近于真值；对直线前进的精子比例而言这一点是非常正确的。计算机辅助精子分析W.H.O 4