细胞培养中如果污染了支原体,会有以下几种影响:
1. 细胞生长受影响:支原体污染会导致细胞生长速度减慢,甚至停止生长。细胞可能会变圆,从培养瓶壁脱落。
2. 细胞形态变化:虽然某些细胞在支原体污染后形态变化不明显,但有些细胞会出现体积增大,细胞碎片增多,培养瓶中细胞间隙出现膜状沉积等现象。
3. 代谢和功能改变:支原体污染会影响细胞的代谢和功能,例如培养液中的精氨酸被大量消耗,引起细胞蛋白质、DNA、rRNA、mRNA的合成障碍。支原体活动还可能引起培养液成分和pH值的变化。
4. 实验结果受影响:使用被支原体污染的细胞进行实验会严重影响实验结果,因为支原体会抑制细胞生长,导致染色体畸变,细胞膜抗原性改变,细胞复苏后存活率降低等。
5. 细胞培养环境的污染:一株污染的细胞可能成为实验室的污染源,对工作区域以及培养箱和液氮罐造成污染,进而污染其他细胞,导致其他细胞继发性污染。
6. 科研结果的重复性问题:由于支原体污染,某些实验结果可能能在支原体阳性的细胞中得到,导致科研结果的重复性受到影响
支原体检测方法LAMP法?北京细胞培养支原体检测试剂价格
qPCR法,即定量聚合酶链式反应(QuantitativePolymeraseChainReaction)法,在支原体检测中的应用主要体现在以下几个方面:
1. 快速定性检测:qPCR法可以快速检测生产原料、细胞库、病毒种子、病毒或细胞收获液、治*用细胞中潜在的支原体污染。
2. 临床样本检测:qPCR法可用于检测实验室样本及临床样本中的支原体,具有快速、特异性强、灵敏度高、稳定性好等优点。
3. 监管要求:基于TaqMan的qPCR测定专门针对检测细胞治*和复杂生物生产样本中的支原体而开发,其性能满足或超出监管要求,如10CFU/mL。
4. 药物质量控制:qPCR法提供早期检测支原体污染的方法,适用于药物质量控制,具有快速、高度特异性、灵敏性,并符合国际准则。
杭州支原体检测要多久支原体污染源和主要类型?
支原体检测实验设计和实验方法需要考虑以下几个关键点:
1. 选择合适的检测方法:根据实验室条件和需求,选择适合的支原体检测方法,如培养法、PCR法、ELISA法、DNA荧光染色法等。
2. 样本的采集与处理:确保样本的采集和处理过程符合无菌操作规范,避免交叉污染。
3. 实验操作的标准化:制定详细的实验操作流程,包括样本接种、培养条件、观察时间点等,以保证实验的可重复性和准确性。
4. 使用适当的培养基:根据支原体的特性选择合适的培养基,如支原体肉汤培养基、精氨酸支原体肉汤培养基等,并确保培养基的灵敏度和特异性。
5. 设置对照组:实验中应包括阳性对照和阴性对照,以验证实验方法的有效性和排除假阳性或假阴性结果。
6. 结果的判定:根据实验方法的不同,设定明确的标准来判定结果,如培养法中观察“荷包蛋”状菌落,PCR法中通过扩增条带的有无来判断。
7. 避免抑制物质的影响:在实验设计中考虑可能存在的抑制物质,并采取适当措施中和或抵消它们的作用。
支原体去除试剂在清*支原体的过程中可能会对细胞的生长状态产生一定的影响。支原体去除试剂是一种非抗*素类试剂,它通过与支原体膜特异性结合,改变支原体膜的通透性,从而导致支原体破裂死亡。尽管该产品在作用期间可能会对细胞的活力和形态有一定的影响,但由于它不能穿过真核细胞的细胞膜,因此不会改变细胞的任何特性。支原体被清*后,细胞在后续的传代过程中能快速恢复其正常的生长和增殖状态,细胞后续的生长增殖几乎无影响。
此外,该产品不含抗*素,不会使支原体发生耐药反应,细胞毒性小。然而,需要注意的是,不同细胞对支原体去除试剂的耐受程度有所差异,可以根据实验结果适当调整细胞量和处理条件。在某些情况下,如果出现细胞变形、生长缓慢等现象,可以更换成标准培养液终止作用,或者调整去除试剂的使用浓度和作用时间。
细胞培养中,支原体检测的重要性?
支原体去除的原理通常涉及以下几个方面:
1. 抗*素作用:使用特定的抗*素制剂来抑制支原体的生长和繁殖。例如,含有喹诺酮类、四环素衍生物类和大环内酯类抗*素的混合制剂,这些抗*素能够抑制支原体的DNA和蛋白合成。
2. 破坏细胞膜:支原体去除剂中的抑菌肽(AMPs)成分通过破坏支原体细胞膜的完整性,导致支原体细胞死亡。
3. 抑制DNA复制:支原体去除剂通过抑制支原体DNA回旋酶活性,有效抑制支原体DNA的复制,从遗传物质着手彻底杀灭支原体。
4. 协同作用:某些支原体去除剂利用抑菌肽(AMPs)和穿膜肽(CPPs)的协同作用来除去支原体,穿膜肽能够帮助抑菌肽更有效地穿透细胞膜,增强其杀灭支原体的能力。
支原体检测假阳性的原因?南京支原体预防现货
支原体检测方法LAMP法的应用。北京细胞培养支原体检测试剂价格
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方法
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灵敏度
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优势
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劣势
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培养法
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☆☆☆
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ü 便捷
ü 便宜
ü 金标准
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ü 费劳力
ü 耗时长
ü 需要特定的培养基
ü 特定支原体种类需要特定的培养基
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DNA染色
(DAPI or Hoescht)
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☆
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ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
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ü 可能难以判读结果
ü 无法鉴别支原体种属
ü 可能假阳性可能性
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间接染色
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☆☆☆
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ü 迅速
ü 便宜
ü 易检测
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ü 费时
ü 需要细胞系指示
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ELISA
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☆☆
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ü 迅速
ü 客观,易判读结果
ü 可以鉴别支原体种属
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ü 受抗体限制
ü 价格高
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免疫染色
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☆☆
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ü 迅速
ü 可检测支原体种属
ü 价格略高
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ü 可检测的支原体种属有限
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放射自显影
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☆☆
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ü 迅速
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ü 难以判读结果
ü 无法鉴别支原体种属
ü 费劳力
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生物发光
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☆☆
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ü 迅速
ü 便捷
ü 便宜
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ü 难以判读结果
ü 无法鉴别支原体种属
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PCR
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☆☆☆
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ü 便宜
ü 迅速
ü 具有特异性
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ü 可能假阳性可能性
ü 检测特异性依赖引物特异性
ü 需要提取DNA
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Real-Time PCR
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☆☆☆
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ü 便捷
ü 迅速
ü 具有特异性
ü 结果可靠
ü 高通量
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ü 可能假阳性可能性
ü 检测特异性依赖引物特异性
ü 需要提取DNA
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LAMP
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☆☆
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ü 便捷
ü 无需DNA提取
ü *需10min左右的实验操作时间
ü 具有特异性
ü 高通量
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ü 可能假阳性可能性
ü 检测特异性依赖引物特异性
北京细胞培养支原体检测试剂价格
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