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疾病动物模型建模基本参数
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疾病动物模型建模企业商机

    动物的选择目前常用的模式生物有果蝇、酵母、小鼠、斑马鱼等。目前主要是小鼠黑色素瘤模型。造模方法黑色素瘤小鼠模型可分为诱发性模型、移植性模型、转基因模型。一、诱导性模型应用:诱导的小鼠模型模拟人类受外界因素影响获得的黑色素瘤,常用于研究预防黑色素瘤形成。1紫外线诱导的小鼠模型通过紫外线照射获得的黑色素瘤模型被认为是临床上可靠的模型。方法:有研究者将HGF/SFcDNA表达的小鼠置于日光灯下用不同剂量(kJ/m2UVB、kJ/m2UVA、)进行紫外诱导15min。模型验证:诱导后的小鼠出现皮肤发红,偶有浅表皮脱屑,在组织病理学中观察到小鼠产生的大多数皮肤黑色素瘤中具有真皮成分,病变显示具有垂直生长期或浸润性恶性黑色素瘤以及淋巴结转移,这些病变与人类患者黑色素瘤页面状扩散的表皮内病变特征相似。缺点:但野生型或正常型小鼠一般不易发生UV诱导的黑色素瘤,因此UV诱导的黑色素瘤小鼠模型往往需要联合免疫缺陷小鼠,其操作技术较难、成本较高。2化学诱导化学致物诱导黑色素瘤小鼠模型大多采用DMBA和TBA诱导。DMBA是一种免疫抑制多环芳烃,其致机理是其活性代谢物被CYP450代谢成致物1,2-环氧化物-3,4-二醇DMBA,进而损伤DNA。TPA是通过蛋白激酶C充当启动子。模型应适用于多数研究者使用,容易复制,实验中便于操作和采集各种标本。虹口区泌尿疾病动物模型建模

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呼吸系统疾病动物模型(animalmodelofrespiratorydiseases)1、肺炎动物模型:通过在主支气管注入活菌液。2、肺气肿模型:给动物气管内或静脉内注入一定量木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、致热溶解酶、败血酶以及由脓性痰和白细胞分离出来的蛋白酶等,可复制成实验性肺气肿。以木瓜蛋白酶形成的实验性肺气肿病变明显而且典型。3、肺水肿模型:用氧化氮吸入可造成大鼠和小鼠中毒性肺水肿,或用气管内注入50%葡萄糖液引起渗透性肺水肿。4、肺纤维化模型:气管内注入博来霉素是目前常用复制肺纤维化动物模型方法。肺病疾病动物模型建模说明书收集研究疾病的生物学信息资料。

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    APOE-/-鼠左颈动脉结扎糖尿病模型目的:用APOE-/-鼠做左颈动脉结扎后注射STZ造糖尿病模型一、材料:动物:APOE-/-鼠;试剂:STZ、柠檬酸缓冲液;器械:眼科剪、眼科弯镊、眼科剪、手术剪、手术镊、6-0非吸收缝合线、4-0缝合线;二、颈动脉结扎模型建立:APOE-/-鼠做左颈动脉内颈支脉和外颈支脉结扎,其中外颈支脉结扎点需要保持甲状腺支脉于左颈动脉畅通;三、糖尿病模型建立:1、柠檬酸缓冲液配制:A液:柠檬酸g+双蒸水100ml;B液:柠檬酸三钠g+双蒸水100ml;A液与B液1:混合,调整PH为;2、STZ液配制:取STZ溶于柠檬酸缓冲液中,浓度为10mg/ml,um滤头过滤,避光,现配现用,10min内使用;术前禁食12h,100mg/kg腹腔注射SZT液,连续2d;四、检测:颈动脉组织HE。

可以严格控制实验条件,增强实验材料的可比性一般说来,临床上很多疾病是十分复杂的,各种因素均起作用,患有心脏病的病人,可能同时又患有肺脏疾病或肾脏疾病等其他疾病,即使疾病完全相同的病人,因病人的年龄、性别、体质、遗传等各不相同,对疾病的发性发展均有影响。采用动物来复制疾病模型,可以选择相同品种、品系、性别、年龄、体重、活动性、健康状态、甚至遗传和微生物等方面严加控制的各种等级的标准实验动物,用单一的病因作用复制成各种疾病。温度、湿度、光照、噪音、饲料等实验条件也可以严格控制。可以克服人类某些疾病潜伏期长,病程长和发病率低的缺点。

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r3):5’-atactccgaggcggatcacaa-3’步骤4、鉴定为pirb基因敲入的f0代雄性小鼠7周龄、雌性小鼠6周龄分别与野生型异性小鼠交配获得f1代杂合子小鼠,图2为本发明f1代杂合子小鼠pirb基因敲除小鼠的流程图,小鼠出生后20天进行pcr鉴定,若有阳性小鼠出生,则表示转基因已经整合到生殖细胞。(1)通过pcr方法对获得的f1代小鼠进行基因型的鉴定:(a)dna的提取:方法1:采用takaraminibestuniversalgenomicdnaextractionkit()来获得高纯度的基因组dna。步骤a.每只小鼠剪下一段尾巴(2~5mm),放入离心管中,加入180μlbuffergl,20μl蛋白激酶k和10μlrnasea。步骤b.将步骤a离心管内于56℃孵育过夜。步骤c.过夜后12000rpm离心2min去除杂质。步骤d.加入200μlbuffergb和200μl无水乙醇,充分混匀。步骤e.将吸附柱放在收集管上,将步骤d得到的样品加到吸附柱里,12000rpm离心2min,弃掉收集管中液体。步骤f.弃去液体后在吸附柱中加入500μlbufferwa,12000rpm离心1min,弃掉收集管中液体。步骤g.在收集管中加入700μlbufferwb,12000rpm离心1min。弃掉收集管中液体。注意:bufferwb需要与100%乙醇预混,沿管壁加入bufferwb冲走残余的盐。步骤h.重复步骤g一次。大量的遗传变异可作为研究人类疾病的借鉴。金山区疾病动物模型建模说明书

利用动物疾病模型来研究人类疾病可以克服平时一些不易见到不便于在病人身上进行实验的人类疾病的研究。虹口区泌尿疾病动物模型建模

糖尿病动物模型(animalmodelofdiabetesmellitus)1、病毒诱发法:DBA/2雌性小鼠,皮下接种脑炎、心肌炎病毒M型变异株4~7d后出现明显的,伴有血中及胰腺中胰岛素含量降低。2、四氧嘧啶法:SD大鼠200g左右,雌雄不限,四氧嘧啶静脉注射1次,观察血糖>300mg/dl,持续2周可以认为造模成功。3、链脲菌素法:将链脲菌素在酸化生理盐水中溶解成1%溶液,给大鼠静脉注射。观察血糖>400mg/dl,持续3d即可认为是造模成功。4、高糖饲喂诱发法:选用SHR/NLHCP大鼠5周龄,喂饲含54%蔗糖饮食。虹口区泌尿疾病动物模型建模

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