奉贤区Balbc裸鼠疾病动物模型建模

本能发明的另一目的是公开了如上所述的方法制备的鼠慢性背根神经压迫模型的用途是将该模型用于腰椎间盘突出***方法研究和/或影像学检测研究。进一步地，该模型用于与磁性相关的***和/或检测方面的研究，比如经颅磁刺激和核磁共振。本发明利用压迫元件插入腰椎椎间孔，模拟腰椎间盘突出后突出物对神经根的持续慢性的机械压迫症状，有益效果有：1.应用机械压迫神经根模拟腰椎间盘突出病理，症状的病因学与临床情况接近；2.相关的疼痛行为类似于特定的慢性疼痛症状，且易于客观测量；3.制备方法简单，对动物损伤小，稳定性好，成功率高；4.造模关键材料压迫元件不受磁场干扰，无在磁场作用下移位风险，有利于后续对动物进行磁疗，经颅磁刺激等***及核磁共振等检查；5.造模关键材料压迫元件不影响磁场，不会对***仪器和核磁共振等仪器产生不良影响；6.此方法获得的模型由于采用了h62黄铜或聚乳酸材料制备的压迫元件，使得研究方法与检测方法不受磁场作用限制，丰富了腰椎间盘突出临床前研究的***方法及影像学检测，为临床研究提供理论依据。以下将结合附图对本发明作进一步说明，以充分说明本发明的目的、技术特征和技术效果。附图说明图1是压迫元件插入椎间孔的结构示意图。动物疾病模型的另一个富有成效的用途。奉贤区Balbc裸鼠疾病动物模型建模

f1代小鼠southern印记的5’探针引物如下：primersfor5’probe:5’probeforwardprimer:5’-aaacgtggagtaggcaatacccagg-3’5’probereverseprimer:5’-aaagaagggtcacctcagtctccct-3’primersfor3’probe:3’probeforwardprimer:5’-ttctgggcaggcttaaaggctaac-3’3’probereverseprimer:5’-aggagcgggagaaatggatatgaag-3’southern印记的目标片段大小如下：5’probe-bamhi:3’probe-avrii:。步骤c、采用限制性内切酶bamhi和avrii对dna进行切割；琼脂糖凝胶电泳分离dna；步骤d、将dna转到尼龙膜上；步骤e、探针变性后，与dna分子进行杂交，nbt/bcip化学显色法显色，拍照观察。southern杂交结果如图6所示，可以看到：6、8、9号pirb基因敲除小鼠如果被bamhi切割，在，wt小鼠只在，如果被avrii切割，pirb基因敲除小鼠在，wt小鼠只在。步骤6、将f1代杂合子小鼠近交获得f2代纯合子pirb基因敲入小鼠，即为本发明所述小鼠pirb基因敲入的动物模型。将本发明获得的动物模型f2代纯合子小鼠与同品系小鼠组织/细胞特异性cre表达的小鼠杂交，获得f3代小鼠，可以实现在不同组织或者细胞类型中敲入pirb基因。对f3代小鼠进行基因型的鉴定：含有无(pirb-cwt)、一个(pirb-chet)或者两个。盐城咨询疾病动物模型建模临床上平时不易见到的疾病可用动物随时复制出来。

腰椎间盘突出是造成全球大部分地区工作缺失和活动受限的主要疾病，随着日常生活节奏的不断加快,腰椎间盘突出症已经成为临床脊柱外科的常见病和多发病,而且发病人群越来越呈现年轻化及普遍化的趋势。该病主要是由于腰椎长期的受力不均或突然性外伤,导致腰椎纤维环出现变形、破裂，纤维环、髓核及软骨终板单独或同时外突,从而压迫到坐骨神经、神经根或马尾神经，患者出现腰部疼痛，牵连股部，下肢足部放射性疼痛，引起神经功能、运动功能障碍，特定身体部位出现麻痹或瘫痪症状。

pcrmix：反应条件：pcr扩增产物的电泳鉴定结果如图3所示，从图3中可以看出，6、8、9号为pirb基因敲入小鼠在、，wt小鼠pcr产物没有这两个扩增产物。(c)短链pcr反应，引物如下：primers(℃):forwardprimer(f4):5’-aacaatcaggctgccgaatctg-3’reverseprimer(r4):5’-ctttattagccagaagtcagatgc-3’expectedpcrproduct:targetedallele:344bppirb基因敲入型小鼠能够扩增出344bp的产物，而野生型没有。pcr体系：反应条件：(2)f1代小鼠测序：通过pcr扩增后测序鉴定小鼠基因型，如图4所示，为6号pirb基因敲入小鼠测序峰图，pcr所用引物如下：sequencingprimerforpcrproduct1：5’sequenceprimer(f3):5’-cacttgctctcccaaagtcgctc-3’sequencingprimerforpcrproduct2:3’sequenceprimer(r3):5’-atactccgaggcggatcacaa-3’(3)southern杂交检测f1代小鼠基因型：采用bamhi和avrii核酸内切酶切割dna分子，切割示意图如图5。具体的southern杂交检测过程如下：步骤a、提取f1代小鼠尾部dna；步骤b、制备探针，通过pcr方法将dig-dutp渗入到步骤a的dna分子中。查阅已有的相关小鼠模型综述文献。

可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。实施例1：建立大鼠卵巢早衰模型步骤如下：将％氯化钠溶液50ml加入规格为10mg的医用顺铂(齐鲁制药，批号：aa1a8029a)中，配制成2mg/kg顺铂注射液，按照10ml/kg连续腹腔注射7天。实施例2：建立大鼠卵巢早衰模型步骤如下：将％氯化钠溶液(齐鲁制药，批号：aa1a8029a)中，配制成3mg/kg顺铂注射液,按照10ml/kg连续腹腔注射7天。实施例3建立大鼠卵巢早衰模型步骤如下：将％氯化钠溶液25ml加入规格为10mg的医用顺铂(齐鲁制药，批号：aa1a8029a)中，配制成4mg/kg顺铂注射液,按照10ml/kg分别在***天及第八天腹腔注射。实施例4：建立大鼠卵巢早衰模型步骤如下：将％氯化钠溶液(齐鲁制药，批号：aa1a8029a)中。避免了在人身上进行实验所带来的风险。江苏Balbc裸鼠疾病动物模型建模

这类动物疾病模型是指各种疾病共同性的一些病理变化过程的模型。奉贤区Balbc裸鼠疾病动物模型建模

1、动物模型名称：FSH联合HCG致超排怀孕小鼠模型2、实验动物种属：KM小鼠或NIH小鼠3、实验动物性别：雌性4、实验动物年龄：3~4周龄5、实验动物体重：16~18g6、实验动物环境：SPF级1、实验方法：注射用重组人促卵泡***（FSH）联合注射绒促性素（HCG）诱导。对雌鼠于按5IU/只腹腔注射50IU/mL的FSH溶液，注射46~48h后按5IU/只再腹腔注射50IU/mL的HCG溶液，并于注射HCG当天下午约16：00~17：00按雌雄鼠1：1合笼。次日早上检查雌鼠阴栓情况。2、检测标准：合笼后次日雌鼠检查出现阴栓，表明成功构建了超排怀孕小鼠模型。奉贤区Balbc裸鼠疾病动物模型建模

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