HEPES在细胞培养中发挥作用的主要原理是基于其两性离子特性和稳定的缓冲能力。以下是具体解释：稳定的缓冲能力***的pH缓冲范围：HEPES的有效缓冲范围在pH6.88.2之间，覆盖了大多数细胞生长所需的pH环境（pH7.27.4）。这使得HEPES能够在细胞培养过程中提供稳定的pH环境，有利于细胞的生长和繁殖。CO2无关性：与许多其他缓冲液不同，HEPES的缓冲能力不受CO2浓度的影响。这意味着在开放式培养或细胞观察时，即使培养基脱离了5%CO2的环境，HEPES也能维持pH的稳定，防止pH迅速升高。国产注射用HEPES缓冲液CDE已登记。安徽高纯HEPES批发
Tris-HCL与HEPES（供注射用）缓冲液应用对比
**常用的缓冲液有很多，如磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、HEPES缓冲液、氨基酸缓冲液等。不同的缓冲液差别液很大，***主要来对比两种**常用的缓冲液：Tris-HCl缓冲液与HEPES缓冲液各自的应用对比。
1、Tris-HCl缓冲液的应用Tris常用于蛋白或者核酸的缓冲液，其在电泳缓冲液中与甘氨酸构成缓冲体系，稳定电泳过程中的pH，由于其具有弱碱性，水溶液的pH在10.5左右，可通过添加HCl或者NaOH制备不同pH的缓冲液，根据缓冲理论，Tris缓冲液的有效范围通常是pH7.0-9.2之间。此外，Tris还可以制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物（磷霉素等）的中间物，在化妆品、医药、涂料以及合成中均有应用。应用于体内时，Tris作为一种不含钠的氨基缓冲碱，在体液中与H2CO3结合，生成碳酸氢盐。因此它能缓冲酸，而且能降低CO2张力，有纠正急性呼吸性酸中毒和代谢性酸中毒双重效果，其作用较碳酸氢钠快而强。HEPES缓冲液对细胞无毒性作用，它是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH范围。使用时浓度为10-50mmol/L，一般培养液内含20mmol/LHEPES即可达到缓冲能力。在体外诊断、DNA/RNA提取、脂质体药物等方面均有应用。
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二、药用功能与应用缓冲作用：HEPES在pH值为6.8~8.2的范围内具有良好的缓冲能力，能够维持溶液pH的稳定。在药用辅料中，HEPES常用于制备各种注射剂、口服液等制剂，以确保药物在储存和使用过程中pH值的稳定。细胞保护作用：HEPES对细胞无毒性作用，且能够降低某些化学物质的细胞毒性。在细胞培养中，HEPES能够维持细胞的正常形态和功能，提高细胞的生存率。促进药物吸收：作为促透剂，HEPES能够促进药物分子通过皮肤或黏膜的吸收，提高药物的生物利用度。其他应用：HEPES还用于制备各种生化试剂盒、诊断试剂等，为医药产品的质量和安全性提供保障。在某些特定的药物制剂中，HEPES还起到稳定剂、增溶剂等作用。
在流式细胞术中的优化HEPES（10 mM）可维持细胞悬液pH稳定，减少荧光染料淬灭。但需与FBS或BSA联用以防止非特异性结合。HEPES缓冲液能减少细胞聚集，提高流式分析的准确性。在长时间流式实验中，HEPES可替代碳酸氢盐缓冲液，避免因CO2逸出导致的pH漂移。HEPES的低离子强度特性减少了对细胞膜的损伤。HEPES缓冲能力在4-37℃范围内变化<10%，优于Tris缓冲液。但高温（>50℃）会导致降解，需避免高压灭菌。HEPES在低温下仍保持良好缓冲能力，适合冷库或冰上操作。在热稳定性实验中，HEPES缓冲液能有效维持反应体系的pH稳定。但需注意HEPES在高温下的降解产物可能干扰实验结果。注射用HEPES国产缓冲液CDE已登记状态为A；
特性与优势***的缓冲范围：HEPES的有效缓冲范围在pH6.8~8.2之间，覆盖了大多数生物实验和细胞培养所需的pH环境。CO2无关性：与许多其他缓冲液不同，HEPES的缓冲能力不受CO2浓度的影响，这使得它在开放式培养或细胞观察等实验中具有独特的优势。低毒性：在适当浓度下，HEPES对细胞无毒性作用，能够为细胞提供一个安全的生长环境。稳定性强：HEPES不易受温度、光照和化学物质的影响，适合长期实验和储存。膜不透性：HEPES具有膜不透性，不会***改变细胞的渗透压，避免了对细胞形态和功能的不良影响。注射用CDE已登记HEPES。河南试剂级HEPES批量
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光敏感性与储存条件HEPES溶液在光照下会生成过氧化物，需避光保存于4℃。使用前建议通过0.22μm滤膜除菌，并检测过氧化物含量（如硫代硫酸钠滴定法）。过氧化物会氧化敏感的生物分子，如硫醇基团和某些荧光染料。长期储存的HEPES溶液应分装并避免反复冻融。商业化的HEPES粉末也应避光保存，因其在光照下会逐渐降解。HEPES溶液的pH会随时间缓慢变化，建议使用前重新校准。蛋白质纯化中的缓冲选择HEPES缓冲液（pH 7.5）适用于离子交换层析，因其不与His标签蛋白竞争结合镍柱。但需避免与EDTA联用，以防金属离子沉淀。HEPES在蛋白质结晶中也常用作缓冲液，其低离子强度减少了对晶体生长的干扰。在蛋白质稳定性研究中，HEPES缓冲液能有效维持蛋白质的天然构象。HEPES还可用于蛋白质的等电点测定，因其缓冲范围覆盖了多数蛋白质的等电点区域。安徽高纯HEPES批发
