fluidlabR-300细菌生长和蛋白质含量的测定
材料和方法
用pLEMO质粒转化Lemo21大肠杆菌细胞,该质粒含有用于阴性选择的氯霉素抗性盒以及由上游LacOperon控制的目的蛋白的基因。我们选择了细胞色素P450酶作为模型酶,因为这些酶对芳香化合物的羟基化具有有趣的催化作用。为了获得充分的表达,将FeCl3和δ-氨基乙酰丙酸添加到LB生长培养基中,以确保血红素基团的正确结合,从而形成全息复合物。
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结果
生长曲线
生长曲线如图1所示,并显示出坚实的线性生长行为,直到OD约为0.8,此时系统收敛到饱和状态。图1:大肠杆菌生长曲线(在0.3消光值时接种IPTG)
校准
曲线使用BSA和制造商的曲线制备说明,通过装置上应用程序“校准曲线”计算标准曲线。得到0.98的R2(图2)
图2:FluidlabR-300显示校准曲线(双倍)
生长曲线
接种过夜预培养物后,在37°C、持续振荡90小时的条件下监测大肠杆菌生长曲线。使用fluidlab的适配器3和600nm的固定波长。从预实验中表明,线性相位从0.3开始,因此此时可以用IPTG进行诱导。 辽宁专注fluidlabR-300便携式细胞计数仪推荐厂家fluidlab R-300便携式OD600菌液浓度测定仪的介绍。
fluidlabR-300便携式细胞计数仪/光谱仪将成熟的光谱仪与自动细胞计数仪相结合,可以执行各种分析,例如吸光度、散射光和时间序列测量、自动细胞计数和免染色存活力测量。直观的操作和精确的测量使fluidlabR-300成为未来的实验室仪器。
⚫可直接在无菌操作台内测量,降低样品污染风险
⚫可直接测量非均质样品并快速绘制成像图,统计样品中各种细胞的含量
⚫快速生成光谱标准曲线,可保存并随时追溯调整,适用于样品定量分析
⚫依照需求输出数据和全息影像,提供后续分析与数据处理
⚫更新软体,随时享用新的系统,无须校正和定期维护
论述
来自异源系统(如大肠杆菌)的蛋白质表达是许多研究领域的重要工具。在这里,我们阐述了fluidlabR-300对于P450酶表达质量评估是如何完成的。使用该工具和标准化学物质可以评估到所产生的酶的纯度和血红素掺入程度只有23%。我们可以得出结论,三组数据极为接近。首先,所表达的P450氧化还原酶*为Bradford试验测定的肽总库的一小部分,该部分可以使用SDS-PAGE或甚至质谱分析来测定。其次,细胞裂解物未经离心产生高杂质,光谱中可以看见在实际含血红素部分附近有一个近紫外峰。细菌细胞对FeCl3和δ-氨基乙酰丙酸的摄取可能需要监测或至少改变,以通过将酶转移到所需的小部分来改善血红素的掺入。监测也可以通过光谱法进行,使用例如铁锌作为比色测定的螯合剂。总体而言,本次质量评估的所有步骤都是通过手持设备完成的,这使得例如在生产环境中的质量控制直接可行,而无需将任何方法转移到另一个分析系统。 fluidlab R-300便携式细胞计数仪/光谱仪上海代理商?
luidlab R-300细胞计数器覆盖了很大的浓度范围
fluidlabR-300可以自动计数细胞的浓度范围(104-107细胞/mL)。为评估线性性能,与竞品相比较,对三种不同细胞类型(HeLa,PBMCs,酵母)的样品进行连续稀释,覆盖到规定的浓度范围进行测试。图2显示了使用fluidlabR-300获得的三种不同细胞系的细胞计数,并与竞品进行了比较。高线性度(如线性回归的R2值所示)表明,fluidlabR-300细胞计数器在宽线性工作范围可稳定地检测和计数不同类型的细胞。此外,用fluidlabR-300测得的细胞总数与竞品相当(线性拟合的斜率接近1)。图二::fluidlabR-300在大浓度范围内的不同细胞类型具有高线性。为了评估fluidlabR-300与竞品比较的线性性能,对三个重复的不同浓度的HeLa细胞,PBMCs和酵母在三个不同的天进行了测量。所有的测量结果用一个标称浓度表示,在所有重复中取平均值(N=9),并计算标准差以评估变异性。竞品执行同样操作。误差线表示标准差。 fluidlab R-300便携式全自动细胞计数仪上海怡赛。广东fluidlabR-300便携式细胞计数仪哪家好
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fluidlab R-300光谱仪性能报告
材料和方法
材料
使用fluidlabR-300进行光度测量时,使用了来自HellmaAnalytics(Müllheim,德国)的F201、F202、F203和F4滤波器。此外,在标准聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)比色皿(10x10mm)中使用不同浓度的亚甲蓝染料(Sigma,Darmstadt,Germany)来测定重复性和比较不同设备之间的线性。
光度参数
为此,采用了具有各种吸收特性的中性玻璃滤光片。在0.3到2.1的宽消光范围内对经过认证的离散波长进行检查。
在anvajo,我们按照该指南工作,因为其中描述的UV/VIS光谱仪标准是世界上要求比较高的,并且在制药和生物技术部门都设置了基准。通过这些严格的质量标准,anvajo fluidlab才能够在受管制的市场,如体外诊断和食品或水质分析中使用。
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