浙江优势fluidlabR-300便携式细胞计数仪调试

fluidlabR-300细菌生长和蛋白质含量的测定

介绍

蛋白质功能和性能的生化分析是工业应用领域基本的研究步骤之一，例如酶的工业用途，这些酶用于降低工业过程的能耗或促进极其复杂的化学修饰。因此，在细菌细胞培养物中重组表达蛋白质是一项重要的实验室任务，这使得用户能够大量生产设计的酶。这里我们展示了fluidlabR-300的用途，帮助用户能够通过使用我们的手持设备来执行表达系统质量控制。包括通过OD600杂散光精确评估细菌生长曲线，以及通过Bradford试剂进行蛋白产量的比色测定。fluidlabR-300可以很容易地一方面在筛选实验中设置标准参数，另一方面在生产现场直接使用确定的参数，而不需要另一个方法转移步骤。 fluidlab R-300便携式细胞计数仪/光谱仪。浙江优势fluidlabR-300便携式细胞计数仪调试

fluidlabR-300细胞计数的准确性和精确性

细胞计数器的准确度(也称为真实度)描述了测量值与“标准”或已知值的接近程度，而精确度（或称精密度）指的是重复测量值彼此之间的接近程度。对于细胞计数，使用血细胞计显微镜下人工计数通常被认为是标准的参考方法。然而，人工计数也容易出错、耗时，并且高度依赖于用户的专业水平。

在这里，我们比较了人工计数、fluidlabR-300和竞品获得的三种不同细胞类型和浓度的细胞计数。所获得的所有数据汇总在图3中。fluidlabR-300细胞计数的准确性在105~107细胞/mL浓度范围内可与人工计数相媲美。在较低的浓度下，准确性不同于人工计数，但与竞品相当。这可能与当视野中检测到的细胞较少时统计数字不好有关。随着细胞浓度的增加，在分析中包含了更多的细胞，误差减小。对于大多数被检测的细胞类型和浓度，fluidlabR-300细胞计数是非常精确的(如图3中的小误差线所示)。总的来说，fluidlabR-300在大范围的细胞类型和浓度上提供了精确和准确的细胞计数结果，每个样本不到30秒。
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用fluidlabR-300计数HeLa细胞(左)，新鲜分离的外周血单核细胞(中)和酵母细胞(右)。全息显微镜图像使研究人员可根据绿色方框高亮显示检测到的细胞来核实细胞计数结果。此外，细胞形态和样品的均匀性程度以及样品中是否存在碎片或污染都可以进行评估。为了看得更清楚，这里只显示一小部分图像，而不是整个视野(5.3mm2)。

为了突出fluidlab R-300在自动细胞计数方面的多功能性，我们在三种不同形态和大小的细胞类型上测试了fluidlab R-300的性能(图1)。HeLa细胞是个在生物学和临床研究中仍然普遍使用的不朽人类细胞系。根据不同的培养条件，HeLa细胞的直径通常为20 - 40 μm范围内。相比之下，外周血单核细胞(PBMCs)是小的人体细胞之一，直径约为7 - 10 μm。PBMCs是一种常见的原代细胞源，用于临床诊断和免疫学的研究。使用传统的细胞计数方法来精确量化原代细胞样本的细胞浓度是具有挑战性的，因为它们通常含有不同的细胞类型及细胞碎片。

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材料和方法

用pLEMO质粒转化Lemo21大肠杆菌细胞，该质粒含有用于阴性选择的氯霉素抗性盒以及由上游LacOperon控制的目的蛋白的基因。我们选择了细胞色素P450酶作为模型酶，因为这些酶对芳香化合物的羟基化具有有趣的催化作用。为了获得充分的表达，将FeCl3和δ-氨基乙酰丙酸添加到LB生长培养基中，以确保血红素基团的正确结合，从而形成全息复合物。

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自动细胞计数确保结果的再现性

为了确保实验和制造过程的可重现性，自动细胞计数具有高度可重复性和微小的易变性是至关重要的。为了评估fluidlabR-300细胞计数器的重复性，我们在单独的10天以三种不同浓度测试了三种不同的细胞类型(HeLa,PBMCs，酵母)。为了尽量减少实验条件的潜在变化，我们使用了酵母和HeLa细胞的冷冻储存，同时每天从血液中新鲜分离PBMCs。

图4显示了fluidlab R-300和竞品在10天内对三种被测试细胞系的测量结果和浓度。每天的变化可反映实验条件的差异，并且两种细胞计数方法都是一样的。表1报告了所有被测试细胞系和浓度在不同天和不同时间的批间重复性。总的来说，fluidlab R-300的批间变化系数(CV)比竞品要小，这突出表明使用fluidlab R-300获得的细胞总数在不同的天数内可重复是非常好的。
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