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Endo H糖苷内切酶H:结构、功能及其在糖生物学中的应用摘要Endo H糖苷内切酶H(Endo H)是一种专门切割N-连接糖链的内切酶,用于糖生物学和蛋白质工程领域。本文将探讨Endo H的结构特性、催化机制、以及其在研究和临床应用中的潜力。引言N-连接糖基化是一种在真核细胞中普遍存在的蛋白质修饰方式,涉及将糖链添加到蛋白质的天冬酰胺残基上。Endo H作为一种内切酶,能够特异性地识别并切割N-连接糖链中的β-N-乙酰葡糖胺苷键,从而在蛋白质工程和生物制药中发挥重要作用。Endo H的结构特性Endo H通常来源于流感嗜血杆菌(Hemophilus influenzae),其分子质量约为50 kDa。该酶由两个结构域组成:一个负责识别糖链的催化结构域和一个有助于酶稳定性的非催化结构域。催化机制Endo H的催化机制涉及对N-连接糖链的特异性识别和切割。酶的活性位点含有多个氨基酸残基,这些残基与糖链的特定结构相互作用,导致酶对底物的高特异性。Endo H催化的糖苷键断裂是一水解反应,需要水分子的参与。肠激酶作为研究工具,用于探索蛋白质结构-功能关系,以及在蛋白质工程中进行蛋白质的定点突变。Recombinant Human TSLP

Recombinant Human TSLP,标准物质

提供来源于牛肺的抑肽酶(动物源性)。产品信息规格1mg/10mg产品性质来源(Source)大肠杆菌表达CAS号(CASNO.)9087-70-1外观(Appearance)白色、类白色、类黄色粉末溶解度(5mg/mlin0.9%NaCl)可溶,澄清或微浊纯度(Purity)≥95%(HPLC)蛋白含量(Proteincontent)≥60%酶浓度(EnzymeConcentration)≥3.0EPU/mgpro活性定义(ActivityDefinition)胰蛋白酶单位:每秒钟能水解1μmoL的N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)为1个胰蛋白酶单位。酶活单位:能抑制1个胰蛋白酶单位的活力称为1个抑肽酶活力单位(EPU)。储存条件冻干粉2~8℃保存,有效期2年。使用方法抑肽酶与蛋白酶是等摩尔有效结合,推荐的结合pH>6.0,在pH<3.0的条件下不结合。可直接使用0.9%NaCl溶解,溶解后可-20℃储存。HA PeptidePNGase F是一种酰胺水解酶,能够特异性地裂解糖蛋白中由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂合和复杂型的寡糖。

Recombinant Human TSLP,标准物质

3C-like蛋白酶是中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)等其它冠状病毒的繁殖过程中极为重要的蛋白酶。它已成为人类在抗冠状病毒领域中的研究热点。本文基于计算生物学方法对与MERS-CoV同属的蝙蝠冠状病毒HKU4(HKU4-CoV)的43个肽类3C-like蛋白酶抑制剂分子,建立三维定量构效关系(3D-QSAR)模型。在基于配体叠合的基础上,发现比较分子相似性指数分析法(CoMSIA)中的四个场组合(位阻场、静电场、氢键供体场与氢键受体场)为比较好的模型(Q2=0.522,Rncv2=0.996,Rpre2=0.904;Q2:交叉验证相关系数,Rncv2:非交叉验证相关系数,Rpre2:验证集分子的预测值相关系数),并借助该模型通过分子对接(docking)与分子动力学(MD)方法阐明了配受体结合作用。实验结果表明:(1)基于比较好的CoMSIA模型基础上的三维等势图形象地说明了分子基团的位阻作用、静电作用、氢键供体与氢键受体作用对分子生物活性的影响;(2)分子对接研究结果显示了疏水性以及结晶水、氨基酸His166和Glu169在配体和受体结合过程中产生重要作用;

CD30,又称KI抗原和Tnfrsf8,是一种120kdaI型跨膜糖蛋白,属于tnf受体超家族。成熟的人CD30由一个361AA细胞外域(ECD)和六个富含半胱氨酸的重复,28AA跨膜段和188AA细胞质域。相比之下,小鼠和大鼠CD30缺乏90AA的ECD,并且只包含三个富含半胱氨酸的重复。在ECD的共同区域内,人CD30与小鼠CD30和大鼠CD30的序列认同率分别为53%和49%。人类CD30的交替剪接产生一个等形,包括细胞质域的C132AA。CD30通常在抗原细胞和B细胞上表达。但是,它在霍奇金氏病(红-斯特恩伯格细胞上)、其他淋巴瘤、慢性炎症中,以及自体免疫。CD30与CD30配体/tnfsf8结合,TH细胞、单核细胞、粒细胞和髓质胸腺上皮细胞上表达。产品性质别名CD30;CD30KI-1;CD30Lreceptor;TNFRSF8;D1S166EKi-1;CD30KI-1工会编号P28908-1表达区间及表达系统重组的人CD30/Tnfrsf8蛋白表达于在C-端有标记和AVI标记的HK293细胞。它含有……。分子量大约41.3公里。由于糖基化,蛋白质迁移到70-100kda基于三联页面结果。纯度SDS-PAGE和高效液相色谱法测定的95%。泛素化是一种蛋白质翻译后修饰过程,涉及将泛素分子共价结合到靶蛋白上。这个过程由一系列酶促反应组成。

Recombinant Human TSLP,标准物质

IdeSProtease全称免疫球蛋白G降解酶,酶活(Enzymeactivity)40U/μL酶活定义(UnitDefinition)在37℃条件下,反应30min,剪切>95%的1μg重组单克隆IgG所需要的酶量定义为一个活性单位。储存条件-25~-15℃保存,有效期1年。使用方法1.在消化液中加入适量IgG(加至5mg);2.在IgG样本中加入IdeS蛋白酶(每1μgIgG加入1个单位的IdeS);3.将样品置于37℃孵育30-60min。IdeS蛋白酶在中性pH或接近中性pH的缓冲中活性强。推荐反应缓冲是50mM磷酸钠,150mMNaCl(pH6.6),多数常见的生物缓冲也适用,比如Tris或PBS;注意:不在此pH范围(例如乙酸盐缓冲液)的缓冲也可能适用,但是孵育时间或酶量需要根据实际情况进行优化。注意事项1.IdeS不能识别切割小鼠IgG1/IgG2b,大鼠、猪、牛和山羊IgG,对小鼠IgG2a和IgG3具有中等酶切活性,酶切小鼠IgG2a和IgG3建议增加IdeS的用量(推荐用量为正常用量的5-10倍)。2.IdeS不能切割非IgG亚型的单抗分子,包括IgA、IgM、IgD和IgE。泛素化可以是单泛素化,也可以是多泛素化或多聚泛素化,这取决于靶蛋白上连接的泛素分子的数量和方式。RNase H

在蛋白质表达体系中,肠激酶常用于切割融合标签,从而释放出目的蛋白,特别是在pET表达系统中。Recombinant Human TSLP

重组型TEV蛋白酶(rTEV)是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶,不仅保持天然TEV酶的功能活性,且在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶,具有很强的位点特异性,严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S),切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。普遍应用的七氨基酸序列为:Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH7.0,30℃时可达活性,但在pH6.0-8.5和温度4-30℃范围内皆有活性(见表1),使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。另外rTEV切割后也能利用其N端的6×His标签,通过Ni-NTA树脂去除,以达到纯化目的蛋白的目的。产品性质来源(Source)大肠杆菌外观(Appearance)无色透明液体比活力(SpecificActivity)5U/μL活性定义(UnitDefinition)在1×rTEVBuffer(50mMTris,pH8.0,0.1mMEDTA,1mMDTT)中,30℃反应1h,剪切>85%的3μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。纯化(Purification)Ni柱亲和纯化纯度(Purity)≥95%(bySDS-PAGE)产品组分运输与保存方法冰袋运输。Recombinant Human TSLP

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RecombinantBiotinylatedHumanOX40/TNFRSF4/CD134Protein(PrimaryAmineLabeling),hFcTag性能参数分子别名(Synonyms)OX40Lreceptor;CD134;TNFRSF4;Ly-70表达区间及表达系统(Source)BiotinylatedHumanOX40/TNFRSF4/CD134Protein(PrimaryAmineLabeling)isexpressedfromHEK293withhFctagattheC-Terminus.ItcontainsLeu29-Ala216.[Accession|P4348...

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