PEI在于可以应用于体内试验。当初试验经费很有限，被逼无奈只能放弃脂质体2000，选择PEI，以至于相当长的时间内，转染试验都不顺利。下面是几点关于PEI转染的注意要点：1. PEI的使用量可以参照脂质体2000的说明书，所用质粒尽量去内2. 转染时，一定要把PEI+DMEM加入到质粒+DMEM中，顺序不可错，轻微混匀，静止20 min3. 转染后4小时，一定要换液！换含有FBS的完全培养液！因为PEI对细胞毒性太大4. 如果后续试验涉及到稳定筛选，建议把血清浓度适当提高。PS：事实证明，PEI是可行的，已经做出稳定细胞系了。分子量为25000的线性PEI转染试剂即Polysciences23966转染效率比较高。25KPEI转染试剂病毒产量
PEI在于可以应用于体内试验。当初试验经费很有限，被逼无奈只能放弃脂质体2000，选择PEI，以至于相当长的时间内，转染试验都不顺利。下面是几点关于PEI转染的注意要点：1. PEI的使用量可以参照脂质体2000的说明书，所用质粒尽量去内2. 转染时，一定要把PEI+DMEM加入到质粒+DMEM中，顺序不可错，轻微混匀，静止20 min3. 转染后4小时，一定要换液！换含有FBS的完全培养液！因为PEI对细胞毒性太大4. 如果后续试验涉及到稳定筛选，建议把血清浓度适当提高。速溶型PEI转染试剂用途哪个品牌的PEI转染试剂性价比高？
注意事项质粒质量：请务必使用高质量转染级无内质粒（推荐使用QIAGEN或者MN公司去内质粒提取试剂盒）。通过260nm光吸收测定DNA浓度，260nm/280nm比值确定DNA纯度（比值应该在1.8~2.0的范围之内）。如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。细胞条件：使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。建议使用GIBCO或者78bio公司血清培养细胞。
准备DNA-PEI复合物：DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用2-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如Falcon5mL/14mL离心管。3.转染细胞：直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染3h后，添加?体积的包含30%血清的生长培养基。PEI转染试剂是带正电的阳离子聚合物与核酸中带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后，通过胞吞进入细胞。
瞬时转染方法1.接种细胞：转染前一晚，用胶原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物：DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL离心管。3.转染细胞：直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染1.5h后，添加½体积的包含30%血清的生长培养基PEI转染试剂包装病毒的滴度有多高？无动物源成分PEI转染试剂用途
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准备 DNA-PEI 复合物： DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表 1 所示，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 2-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液 的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙 烯管，例如 Falcon 5 mL /14 mL 离心管。转染细胞：直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染3h后，添加?体积的包含30%血清的生长培养基。4.孵育细胞和分析结果：在CO2培养箱中37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后快7h即可检测到转入基因的表达。请自行确定检测时间。25KPEI转染试剂病毒产量
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