稳定转染方法1.接种细胞：转染前，用胰酶消化细胞并计数。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，总体积如表1所示，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物：DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用2-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如Falcon5mL/14mL离心管。哪个品牌的PEI转染试剂质量好？化学合成PEI转染试剂作用原理
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对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞，在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板，可适当降低铺板密度，以确保转染时细胞的汇合度仍为70~80%。2.对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情况下，DNA-PEI复合物仍能转染细胞，但是DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。我们推荐使用Opti-MEMITM培养基以达到*转染效率。其他的无蛋白培养基则需测试与线性PEI转染试剂的兼容性。
细胞转染实验是生物医学实验室中常规的研究手段，目的是把外源基因、蛋白或者小分子导入到靶细胞内。目前主要有三种主流方法：生物转染，物理转染和化学转染。其中生物转染主要是利用病毒等微生物作为基因导入载体，以慢病毒、腺病毒和腺相关病毒等常见，其侵染效率可以达到90%以上，但常因安全性等问题，很多实验室对其敬而远之。物理转染主要包括显微注射、电穿孔和基因，无论哪一种都需要特定的设备，且一分钱一分货，性能好的价格也都很性感。美国Polysciences提供化学PEI转染试剂。
转染细胞：直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染3h后，添加?体积的包含30%血清的生长培养基。孵育细胞和分析结果：在CO2培养箱中37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后快7h即可检测到转入基因的表达。转染24h后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释10倍以上），在CO2培养箱中37℃孵育过一晚。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约1~2周可筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。哪个分子量的PEI转染试剂好？40KPEI转染试剂哪个品牌好
PEI 25K和40K哪个好用？化学合成PEI转染试剂作用原理
准备DNA-PEI复合物：DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用2-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如Falcon5mL/14mL离心管。3.转染细胞：直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染3h后，添加?体积的包含30%血清的生长培养基。4.孵育细胞和分析结果：在CO2培养箱中37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后快7h即可检测到转入基因的表达。5.转染24h后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释10倍以上），在CO2培养箱中37℃孵育过一晚。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约1~2周可筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。化学合成PEI转染试剂作用原理
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