一提起蛋白质浓缩、更换缓冲液,我们都会想起超滤。这是一种我们都很熟悉的膜分离技术。它可用来分离溶液中极小的颗粒和溶解的分子。这种方法的较大特点是操作简便,只需要浓缩离心管和离心机,即可圆满完成我们的任务。与层析、透析等方法相比,超滤对被处理的分子更加温和。它不需要有机萃取,就不会导致蛋白变性。这种方法非常高效,可同时浓缩和纯化分子。操作可在低温(比如冷库)下进行。另外,快速、便宜,也是许多人青睐它的原因。浓缩离心管的操作很简单。选择适当的浓缩离心管,加入待处理的样本,按照离心管的指示进行离心操作,之后回收截留的样本。在离心力的作用下,溶液中的小分子溶质和溶剂透过超滤膜,被收集在滤过液收集瓶中,而大分子溶质被超滤膜截留在浓缩离心管中。这种分离的主要依据是分子大小,但分子形状和电荷等其他因素也会有影响。超滤离心管也可用于海洋科学研究中,以检测水样中的微量元素和化合物。安徽100K超滤离心管能干什么
超滤离心管使用注意事项:当浓缩到剩下1ml时,取50ul缓冲溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mgml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的缓冲溶液,直到蛋白不发生沉淀为止。舟山浓缩超滤离心管使用超滤离心管时应注意保持样品干燥、无污染和清洁。
玻璃离心管玻璃离心管是由玻璃制成的,不同厂家可能使用的玻璃成分不同,所以强度上可能会略有差异。我们的普通玻璃试管可以承受的相对离心力(RCF) 通常小于3000g ,而硼硅玻璃管一般可以承受超过10000g 以上的相对离心力。但由于玻璃离心管质量易碎,所以玻璃管一般不用于高速离心机,用得也不多。由于玻璃本身的特性,它具有良好的化学稳定性,能与酸、碱和有机溶剂和平共存。玻璃管外形稳定,能承受一定程度的挤压,但不能抵抗碰撞,在 高速离心时容易破碎,虽然能抵抗高温,能抵抗热冲击,但在温度突然剧烈变化的环境中也很容易断裂。
超滤管采用其特有的再生纤维素膜,定义为:一个确定NMWL 的超滤膜应该截留至少90% 以上的这个大小的球形分子,即100kDa的球形蛋白用100k的再生纤维素膜得率超过90%。请仔细查看以下默克生命科学官方数据:(以0.5mL的AU0.5为例,其它型号截留分子量的选择原则一致,具体离心力和离心时间不同。截留分子量选小啦!看到这个表,你是否发现原来抱怨超滤管流速偏慢的根源来自对于截留分子量定义的误解。膜孔径要小于目的分子这是一原则。如果分子有近似球形的立体结构(而非明显的线性分子),在再生纤维素超滤膜体系内,选择“等于”或“略小于”目的分子的截留分子量的超滤管是较佳选择,这样操作起来又快又好,既保证了样品回收率,又缩短了离心时间,大幅降低大分子损伤风险。超滤离心管还可以用于分离和提取植物中的活性成分和化合物。
超滤离心管的分子量选择:按照样品量和目标分子量选择适当的超滤离心管,为了得到较高的收率,所选滤膜的截留分子量MWCO建议选择所需截留分子大小的1/3左右,不超过目标分子量的一半。因为超滤膜上孔径是平均孔径,膜上的孔并非均匀,离心高压下也可能渗漏,因此截留孔径越小,流速越慢但截留比例更大。如果样本浓度低体积大,可选择较小容积的超滤管多次重复加样离心。如果同时需要脱盐和去除可溶小分子杂质,可将待浓缩样品稀释到超滤管较大容积再离心,重复2次可除去99%盐。避免过长时间或者过速离心,虽然优良品质的产品都有防死端设计,可避免过度离心造成膜表面干而造成不可逆吸附。避免过度浓缩,体积越小,越容易因表面吸附而损失得率。离心后用Tips轻轻吹吸几次滤膜截留的溶液,必要时补加一定体积的缓冲液冲洗膜表面,有助于减少膜表面吸附,能提高回收率。尽量避免Tips接触膜表面。超滤离心管可用于从血浆或尿液中提取蛋白质和核酸等大分子化合物。金华10K超滤离心管价钱多少
超滤离心管能够去除混合物中的杂质和低分子量化合物,得到高纯度的目标化合物。安徽100K超滤离心管能干什么
超滤离心管的分子量选择:按照样品量和目标分子量选择适当的超滤离心管,为了得到较高的收率,所选滤膜的截留分子量MWCO建议选择所需截留分子大小的1/3左右,不超过目标分子量的一半。因为超滤膜上孔径是平均孔径,膜上的孔并非均匀,离心高压下也可能渗漏,因此截留孔径越小,流速越慢但截留比例更大。如果样本浓度低体积大,可选择较小容积的超滤管多次重复加样离心。如果同时需要脱盐和去除可溶小分子杂质,可将待浓缩样品稀释到超滤管较大容积再离心,重复2次可除去99%盐。避免过长时间或者过速离心,虽然优良品质的产品都有防死端设计,可避免过度离心造成膜表面干而造成不可逆吸附。安徽100K超滤离心管能干什么