标准菌株多次冻融，会不可逆损伤菌体哪些性能？

南京乐诊生物技术有限公司2026-06-26

实验室日常取用甘油冻存的南京乐诊标准菌株时，反复冻融是高频操作误区，多数人员认为轻微冻融不影响菌种使用，实则多次冻融会对菌体结构与性能造成不可逆损伤，导致菌株报废、实验数据失效，是菌种管护中需要严格杜绝的操作。标准菌株低温冻存的原理是通过低温恒温环境抑制菌体代谢，维持休眠稳态，反复冻融的温差冲击会持续破坏菌体细胞结构、代谢系统与遗传性状，损伤不可逆，无法通过纯化、传代修复，主要体现在四大性能损伤。是细胞膜结构破损，菌体活性大幅衰减。每次冻融都会造成菌体细胞内水分结冰、膨胀破壁，再次融化后细胞膜通透性紊乱，细胞质流失，多次冻融后大量菌体破损死亡，活菌数量骤减，复苏后菌落长势微弱、稀疏，阳性对照长势不达标，各类实验基线失控。第二是代谢酶长久失活，生化性状彻底偏移。菌体特异性生化酶对温度波动极度敏感，多次冻融后酶蛋白变性失活，菌株标志性生化反应消失，发酵、溶血、产酶等特征反应由阳性转阴性，菌种鉴定图谱匹配失败，出现根本性菌种误判。第三是芽孢菌株产孢能力不可逆退化。芽孢类标准菌株反复冻融后，芽孢生成相关基因活性弱化，菌体偏向营养生长，产孢率大幅下降，若用于自制生物指示剂，会出现芽孢产量不足、耐热D值不达标，灭菌监测灵敏度下降，掩盖设备灭菌隐患。第四是菌株抗性性状漂移，质控标准失效。药敏、质控菌株多次冻融后，细胞稳态失衡，自发变异概率大幅提升，耐药性、环境耐受度发生偏移，药敏抑菌圈数值持续偏离质控范围，无法用于药敏校准、培养基性能验证等精细质控工作。合规管护标准明确规定，标准菌株甘油冻存管禁止反复冻融，单次取用后立即归位冷藏，避免室温解冻；可分装多支小管冻存，单次取用单支小管，杜绝整管反复冻融。若菌株冻融次数超过三次，即便外观无异常，也需直接报废，更换全新活化菌株。杜绝反复冻融操作，完整保全标准菌株细胞结构、代谢酶活性与遗传性状，长期保障菌种质控精细度，减少菌种损耗与实验返工，适配实验室长效质控工作需求。