葡萄球菌属因其聚成葡萄串一样而得名。是常见的化脓性球菌。医务人员带菌率高达70%以上。而且可能是耐药性菌株,可成为院内传染的重要传染源。葡萄球菌呈球形或椭圆形。直径约0.5--1μm。经常以葡萄串状排列,有时可能散在、成双、短链状存在。没有鞭毛、没有芽孢,体外培养一般不形成荚膜,在体内却可形成荚膜。革兰染色呈阳性。衰老、死亡、被吞噬细胞吞噬、青霉素等药物作用下,菌体可革兰染色阴性。葡萄球菌对营养要求不高,普通培养基生长良好。需氧或兼性厌氧。在18--40℃均可生长。耐盐性强。在含有10%氯化钠培养基中能生长,可用高盐培养基分离菌种。普通琼脂平板上形成圆形,表面光滑湿润,不透明菌落。典型菌株产生脂溶性的金黄色的色素而使菌落呈金黄色。在血琼脂平板上,因金黄色葡萄球菌能产生溶素,在菌落周围形成明显的透明溶血环。铜绿假单胞菌菌体的一端有单鞭毛。花生根瘤菌菌种
大肠杆菌摇瓶发酵常用的化学合成培养基有LB、SOB、SOC等。培养基中通常含有碳(能)源、氮源,以及微营养物如微生物和微量元素,这些营养物的浓度与比例,对实现生产重组微生物的高密度发酵是很重要的。培养基中复合氮源的种类对重组大肠杆菌的高密度发酵也很重要。在某些情况下,向培养基中添加一些营养物质能提高生产率。这些营养物的作用可能是作为产物前体,也有可能是阻止产物的降解。发酵过程:1、种子活化:将保存于-80℃的种子甘油菌室温解冻,取500ul菌接入50mlLB培养基,再加入相对应的筛选抗性,37℃培养7h。2、上罐:将上步活化的种子50ml接入3L发酵培养基中,设定温度,空气流量,压力值,监控DO与PH值。3、从发酵4小时开始,每隔1h进行取样检测OD,当OD值≥40时,开始诱导。4、诱导物:IPTG(1mol/L,过滤除菌),加入4ml,至终浓度达到1mmol/L,诱导阶段温度控制再35℃,其他条件不变,诱导10小时。5、诱导结束,放罐,5000rpm离心,收集菌体,于-80℃冰箱保存。卓氏海源菌菌株大多数的大肠杆菌菌株具有荚膜或微荚膜结构,但是不能形成芽孢。
铜绿假单胞杆菌离心的目的是两个,去除DMSO,去除死细胞,这个是标准流程,但对一般人来说,把握不好离心转速和时间,转的不够活细胞沉底的少,细胞就全被扔掉了,转过了活细胞会受压过大,死亡。此外在操作过程中容易污染,所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜(DMSO),DMSO对细胞有一定的毒副作用,所以须将离心后的液体前倒净,且一定倒干净。关于细胞贴壁少的问题,冻存细胞解冻时1毫升细胞液要加10毫升-15m培养液,而培养基越少细胞越容易贴附。复苏细胞分装的问题,试验中复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中,分装过多,细胞浓度过低,不利于细胞的贴壁。
大肠杆菌和其它兼性厌氧菌构成肠道微生物群的约0.1%,粪便-口腔传播是细菌致病菌株致病的主要途径。细胞能够在体外存活有限的时间,这使它们成为检测粪便污染环境样本的潜在指示生物。然而,越来越多的研究已经研究了环境持久性大肠杆菌它可以在宿主之外长时间存活。这种细菌可以在实验室环境中容易且廉价地生长和培养,并且已经被深入研究了60多年。大肠杆菌是一种化学异养生物,其化学定义的培养基必须包含碳源和能量源。大肠杆菌是研究至普遍的原核模型生物,也是生物技术和微生物学领域的重要物种,在那里它已经作为宿主生物进行了大部分重组DNA的工作。在有利的条件下,繁殖需要20分钟。当枯草芽孢杆菌作用于作物或土壤时,能够在作物根际或体内定殖,并起到特定肥料效应。
目前已知的大肠杆菌和志贺氏菌的完整基因组序列有三百多个。2014年之前,大肠杆菌类型菌株的基因组序列被添加到这个集中中。这些序列的比较显示出明显的多样性。每个基因组中只有大约20%的表示序列存在于每个分离株中,而每个基因组中大约80%在分离株之间有所不同。每个基因组包含4,000到5,500个基因,但是在所有已测序的大肠杆菌菌株(泛基因组)中,不同基因的总数超过16000个。这种非常多的组成基因被解释为三分之二的大肠杆菌泛基因组起源于其他物种,并通过水平基因转移过程到达。将金黄色葡萄球培养在哥伦比亚血平板中,在光下观察菌落会发现周围产生了透明的溶血圈。镰孢属菌种
铜绿假单胞菌的菌体有时呈球杆状或线状,成对或短链状排列。花生根瘤菌菌种
在BP平板上,金黄色葡萄球菌的典型菌落特征是呈圆形,表面光滑、凸起、湿润、菌落直径为2mm~3mm,颜色呈灰黑色至黑色,有光泽,常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈(沉淀),其外常有一清晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感。有时可见到不分解脂肪的菌株,除没有不透明圈和清晰带外,其他外观基本相同。从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落,其黑色常较典型菌落浅些,且外观可能较粗糙,质地较干燥。在血平板上,形成菌落较大,圆形、光滑凸起、湿润、金黄色(有时为白GB4789.10—20163色),菌落周围可见完全透明溶血圈。花生根瘤菌菌种
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