Amicon® Pro纯化超滤管简明操作指南 亲和纯化 用于纯化GST•Tag，His•Tag等重组表达蛋白及抗体，适合～0.5 mL裂解液操作 6次低速离心，总耗时~100分钟（含65分钟孵育时间） 1. 在Amicon® Pro上样池中加入200μL亲和纯化树脂（50%悬浊液）和1.5 mL漂洗缓冲液。 1,000×g离心1 min。 2. 加入0.5 mL样品并与树脂吸打混匀。孵育1 h，其间可温和搅动促进结合。 3. 1,000×g离心1 min 以去除未结合杂质。 4. 加入1.5 mL漂洗缓冲液，1,000×g离心1 min。 外泌体用于细胞学或动物实验前的无菌处理 已经经过上述方法制备的外泌体在进行细胞或动物实验之前还需进行一步除菌过滤，这个时候考虑到得率，应该采用离心法处理，以减少过滤时的外泌体样品损失。 超滤方法纯化具体操作步骤举例 Amicon® Ultra-15 超滤管 (10 kDa MWCO) 用Steriflip®真空抽滤对样品进行澄清[目录号SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜]上海超滤浓缩管哪家比较专业。常州默克超滤浓缩管
截留 截留有时也称为排阻。水合程度、离子和空间位置效应会导致分子量相近 的分子表现非常不同的截留状态。许多生物大分子在不同的 pH 或离子强 度改变的情况下倾向于聚集或改变构象，因此其有效大小可能比 “天然” 分子大恨多，从而导致排阻增加。比如，有些蛋白质在某些缓冲液条件下 会发生多聚化，而另一些则发生解聚（如血红素蛋白）成亚基。这使选择 合适截留分子量的膜变得复杂。以默克密理博的经验，我们通常推荐选择 为目的分子大小一半的膜作为尝试的优先，再根据实际情况加以调整。常州默克超滤浓缩管你知道超滤浓缩管的用途吗？
离心方式的超滤方法进行溶液置换也被称为“渗滤”，操作时样品首先被浓缩，继而加入新的溶液，再次浓缩时，原溶液已经被换成选定的溶液。 化学相容性与溶出 样品的化学背景有时很多样而复杂，过滤的过程中很重要的一点是操作过程不应给样品带来新的污染。所以滤膜和装置与样品接触的其它部分都不能与样品中的化学成分发生反应而产生溶出污染。关于默克密理博各种微滤、超滤产品的化学相容性请参考产品使用说明书或垂询技术支持专线 。回收率及其重要性超滤的**终目的常常是很大程度地回收目标溶质，但膜的很多特性会对这一目的产生影响。影响回收的因素包括：• 标称分子量限制（NMWL）/ 核酸截留分子量（NCO）• 截留 • 浓差极化 • 通量
高浓度样品浓缩 Centriprep®超滤管 Centriprep®超滤管是一次性使用的离心管，可以用于2-15mL生物样品的纯化、浓缩、脱盐等过滤应用。这种离心超滤管流速很快，设计紧凑，螺旋盖使用起来非常方便，过滤收集管内置低吸附的Ultracel®再生纤维素膜，装有气密盖。 优点与应用 特有的反向流操作模式，较大的死体积 采用Ultracel®膜，用于浓缩和纯化富含颗粒物 的高浓度样品，样品回收率>90% 配合标准的50mL离心管吊篮式转子使用 从发酵培养基、细胞培养基、细胞裂解液中分 离低分子量溶质Millipore超滤浓缩管用于蛋白超滤、浓缩、除盐！
虽然影响因素较多，我们通常建议截留分子量约为目的分子分子量一半的膜，这样可以比较大化样品的回收，同时节省过滤时间。截留微滤中膜的孔径大小通常以微米计，表示大于这一规格的颗粒将被膜截留。超滤膜根据NMWL分级，有时也用截留分子量（MWCO）。NMWL表示大多数大于这个值的分子将在超滤时截留。一个确定NMWL的超滤膜应该截留至少90%以上的这个大小的球形分子。但为了保险起见，实践中选择的膜孔径要小于目的分子。缓冲液置换时 膜截留分子量应该充分大于流过的溶质。当膜材料相同时，孔径减小 会增加排阻而减小滤过率。截留及产物回收的影响因素包括分子的形状、带电性质、样品浓度及组成成分、操作条件、使用的设备构造等。因此常常发生同样 NMWL 的膜对一定范围内的不同分子截留效果有一定差异的情况。使用超滤方法进行样品浓缩或除盐时，需要谨慎地选择合适的 NMWL膜和设备。虽然影响因素较多，我们通常建议截 留分子量约为目的分子分子量一半的膜，这样可以比较大化样品的回收，同时节省过滤时间。超滤浓缩管的好处有很多。静安区默克超滤浓缩管一级代理
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上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管（有5种截留分子量规格可选）。 6. 加入1 mL洗脱缓冲液与树脂混匀。孵育5 min。 7. 4,000×g离心15 min。 8. 加上蛋白样品**终需要的缓冲液1.5 mL。4,000×g离心15 min，置换缓冲液的同时进行浓缩。 9. 倒转Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管，1,000×g离心回收纯化和浓缩好的蛋白。 * 本操作受Amicon® Ultra-0.5 mL超滤管～1 mg蛋白的容量限制。体积较大而蛋白浓度较低的情况下也可以采用如上方法，但溶液体积和离心时间等需要略加优化。 用Protein A或G对抗体进行亲和纯化常州默克超滤浓缩管
